BPI23-Fcγ1重组蛋白原核表达载体的构建、表达和生物学活性的测定

来源 :中国医学科学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhym821211
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目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体,转化大肠杆菌 DH5α,诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术,从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc( Fcγ 1)的基因;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体;转化感受态大肠杆菌 DH5α,通过温控诱导表达 BPI23- Fcγ 1重组蛋白;测定 BPI23- Fcγ 1重组蛋白的抗菌及免疫学活性。结果 (1)RT- PCR获得预期的扩增产物— BPI600bp和 Fcγ 1 700bp基因片段; (2)成功构建 pUC18- BPI180、 pUC18- BPI420和 pUC18- Fcγ 1700重组克隆载体, DNA测序结果与文献报道一致; (3)成功构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体,酶切图谱分析与预期结果相符; (4)BPI23- Fcγ 1重组蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的 20%; (5)复性后重组蛋白具有抗菌活性和激活补体、介导调理吞噬等作用。结论 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体构建成功,并在大肠杆菌中得到表达,获得具有 BPI和 IgGFc双重生物学活性的重组抗菌蛋白。
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