MicroRNA-155在诱导RAW264.7细胞分泌CXCL10间接促进Th1细胞分化中作用研究

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目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-155对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-LDL particles,oxLDL)活化的RAW264.7细胞分泌的趋化因子的调控作用及其对辅助性T细胞1(helper T cell 1, Th1)分化的间接调控作用。方法:培养RAW264.7细胞,向细胞内转染寡聚核苷酸(miR-ctrl、miR-155 mimics、miR-155 inhibitor、miR-155 mimics+siRNA-ctrl和miR-155 mimics+CXCL10 siRNA),并以此对细胞进行分组。oxLDL刺激所有细胞活化,实时定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)方法检测趋化因子表达情况,将上述细胞与纯化并活化的CD4n +T细胞共培养后,流式细胞术检测Th1细胞的分化情况。n 结果:miR-155促进oxLDL活化的RAW264.7细胞分泌CXCL10(mRNA水平:oxLDL刺激细胞6、12和24 h的n F值分别为44.86、214.91、688.88;蛋白水平:oxLDL刺激细胞6、12和24 h的n F值分别为284.57、144.66、60.95,n P值均<0.05);在RAW264.7中上调miR-155的表达可促进CD4n +T细胞分化为Th1细胞(n F=26.72,n P<0.05);阻断RAW264.7细胞中CXCL10的表达则抑制miR-155对Th1细胞的间接调控作用(n t=3.78,n P<0.05)。n 结论:miR-155可通过促进oxLDL活化的RAW264.7细胞分泌CXCL10间接促进Th1细胞分化。“,”Objective:To illustrate the role of microRNA (miR) -155 in regulating the secretion of CXCL10 by oxidized-LDL particles (oxLDL)-activated RAW264.7 cells and its indirect role in regulating helper T cell 1 (Th1) cells differentiation.Methods:RAW264.7 cells were divided into 5 groups by transfected with different oligonucleotides (including miR-ctrl, miR-155 mimics, miR-155 inhibitor, miR-155 mimics+ siRNA-ctrl, and miR-155 mimics+ CXCL10 siRNA), then cells were treated with oxLDL, and the level of chemokines were detected with quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) and enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA). Then these cells were co-cultured with purified and activated CD4n + T cells, Th1 differentiation was examined with flow cytometry.n Results:miR-155 enhances the secretion of CXCL10 in oxLDL-activated RAW264.7 cells (mRNA level: n F values of oxLDL stimulated cells for 6, 12, and 24 h were 44.86, 214.91, 688.88, respectively; protein level: n F values of oxLDL stimulated cells for 6, 12, and 24 h were 284.57, 144.66, 60.95, respectively, all n P values <0.05). Up-regulated miR-155 in oxLDL-activated RAW264.7 cells can promote the differentiation of CD4 n + T cells into Th1 cells (n F=26.12, n P<0.05). Knock-down CXCL10 expression in RAW264.7 cells can suppress the indirect function of miR-155 in regulating Th1 cells differentiation (n t=3.78, n P<0.05).n Conclusions:miR-155 can indirectly enhance Th1 cell differentiation through promoting CXCL10 expression which secreted by oxLDL-activated RAW264.7 cells.
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