基于rpoB基因的阪崎克罗诺杆菌分子检测体系的建立及其应用

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通过生物信息学的方法,利用阪崎克罗诺杆菌及其邻近细菌的rpoB基因序列设计了一对特异性引物ESrpoBF及ESrpoBR。特异性检测表明,该对引物能对阪崎克罗诺杆菌进行有效的扩增,PCR扩增产物为154bp大小的条带,而对其余近缘肠杆菌均无阳性扩增。灵敏度检测显示,该对引物在常规PCR及实时定量PCR的检测极限分别为10 pg/μL和10 fg/μL。进一步利用该对引物对浙江省14个重要饮用水源地进行分子检测。结果表明,在6个饮用水源检测到阪崎克罗诺杆菌,检出率为43%。 By bioinformatics method, a pair of specific primers ESrpoBF and ESrpoBR were designed by using the rpoB gene sequence of Corynebacterium Sakanoschi and its neighboring bacteria. Specific tests showed that the pair of primers could effectively amplify Corynebacterium sakazakii. The PCR product was a 154bp band, but no positive amplification was observed for the other strains of Enterobacter cloacae. The sensitivity test showed that the detection limits of the pair of primers in conventional PCR and real-time quantitative PCR were 10 pg / μL and 10 fg / μL, respectively. Further use of the pair of primers for molecular detection of 14 important drinking water sources in Zhejiang Province. The results showed that Kronassargus sakazakii was detected in 6 drinking water sources, with a detection rate of 43%.
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