【摘 要】
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我们完成了对多种生物活性分子探针的化学修饰,为下一阶段的应用研究奠定了探针基础。首先,在细胞膜通透性方面,发现我们的核酸分子探针,由于其高度的化学修饰和较短的链长,
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我们完成了对多种生物活性分子探针的化学修饰,为下一阶段的应用研究奠定了探针基础。首先,在细胞膜通透性方面,发现我们的核酸分子探针,由于其高度的化学修饰和较短的链长,已经实现了不需特殊修饰保护,即具有在活细胞中的稳定性和一定的通透性。其次,我们利用亚克隆技术在体外将一种酵母菌中亚铜离子结合蛋白Ace1的关键区域插入到黄色荧光蛋白(YFP)构建4种不同的模型中,有效提高了其荧光强度;我们将此传感器成功应用于检测细胞体内亚铜离子浓度。通过体外和体内的验证,我们研发的亚铜离子荧光传感器可以应用于研究生物体系内铜离子的代谢研究。最后,对拟南芥根表皮细胞质膜铵转运蛋白(AMT1;3)进行了活体动态分析。研究发现:AMT1;3-EGFP在正常供铵状态下,在质膜上的运动状态主要有两种:一种是出现后立即消失;另外一种是在膜上停留一段时间后消失;并且发现AMT1;3-EGFP在不同铵浓度下,这两种运动状态的荧光点所占的比例不同,表明铵浓度决定AMT1;3-EGFP的膜表面停留时间。更重要的是,高铵胁迫下会引起AMT1;3-EGFP聚合并内吞,而这种内吞对于调控AMT1;3的转运活性发挥着重要的作用;并且高铵所引起的快速内吞作用是由铵根离子特异引起的。
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