腺病毒介导的RNAi技术抑制Peroxiredoxin Ⅰ的表达

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目的:为深入研究PeroxiredoxinⅠ(Prx—Ⅰ)基因与肿瘤细胞放射敏感性的关系,构建基于腺病毒的抑制Prx—Ⅰ基因表达的RNAi载体。方法:从质粒载体pAVU6-Prx切下包含u6启动子在内的表达盒,连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack,然后在大肠杆菌中重组为完整腺病毒DNA,并将其转染293包装细胞制备腺病毒颗粒,再利用腺病毒感染目的肿瘤细胞,干扰其Prx—Ⅰ基因的表达。结果:成功地将U6表达盒连接到穿梭载体,获得重组的腺病毒DNA,并制备出高滴度病毒。将病毒感染肿瘤细胞SW480以后可以明显
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