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【摘要】 目的：研究血清中PLA-2与COX-2浓度与早产的关系。方法：选择2013年7-12月本院收治的34例先兆早产孕妇作为研究组，选择同期同孕龄的32例正常孕妇作为对照组，采用酶联免疫吸附法研究两组血清中PLA-2与COX-2水平的变化，分析PLA-2、COX-2浓度与早产的相关性。结果：研究组各孕期血清中PLA-2与COX-2浓度均显著高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），随着孕期的延长，孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度也随之增加，且PLA-2与COX-2的浓度没有相关性。结论：母体的血清中PLA-2与COX-2浓度可以作为预测早产的一项指标。
【关键词】 PLA-2； COX-2； 酶联免疫吸附法； 早产
【Abstract】 Objective： To study the relationship between serum PLA-2，COX-2 and premature.Method：34 pregnant women with threatened premature labor in our hospital from July 2013 to December 2013 were selected as the research group.32 normal pregnant women who had the same gestational age with the research group were selected as the control group at the same time.The levels of PLA-2 and COX-2 in serum of the two groups were detected through enzyme-linked immunosorbent assay.The relationship between the concentrations of PLA-2，COX-2 and premature was analyzed.Result：The concentrations of PLA-2 and COX-2 of different pregnants in the research group were all higher than those in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The concentrations of PLA-2 and COX-2 increased according with the increase of pregnant.The concentrations of these two indexes had no correlation.Conclusion：The concentrations of PLA-2 and COX-2 in maternal serum can be used as an index to predict preterm delivery.
【Key words】 PLA-2； COX-2； ELISA； Premature
早产是产科常见并发症之一，指妊娠满28周至不足37周间分娩，约占分娩总数的5%～15%，近年来发生率有所上升，是引起围产儿死亡的首要原因[1-2]。对早产的病因和治疗等方面的研究在近年来取得巨大成果，但早产的发生率仍有增多，因此降低围生儿死亡率的关键步骤就是早期预测早产的发生[3-4]。目前预测早产的方法有：（1）阴道B型超声检查宫颈内口漏斗形成及宫颈长度情况；（2）血清生化标志物：包括促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、细胞因子、C反应蛋白、游离雌三醇、胎儿游离DNA检测等；（3）生殖道标志物：包括阴道后穹隆棉试纸检测胎儿纤维连接蛋白（fFN）、IL-8、IL-6、中性粒细胞弹性蛋白酶和基质金属蛋白酶等。尚未见到将血清PLA-2和COX-2水平的变化用于预测早产的文献报道。因此，本研究将探讨孕妇血清PLA-2与COX-2水平的变化及其与早产的相关性，以找到一种新的预测早产的方法，旨在为临床预防和治疗早产提供客观依据，现具体报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年7-12月本院收治的34例先兆早产孕妇作为研究组，选择同期同孕龄的32例正常孕妇作为对照组。研究组的入选标准：孕28～36周，宫缩存在1 h以上，宫口开大<2 cm，宫缩>30 s/7～10 min，胎膜完整无明显阴道流血，入院行保胎治疗（伴有妊娠合并症及1 d内有性交者排除在外）。两组年龄、取样孕周及孕次等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法 在各组孕妇知情情况下抽取静脉血4 mL，置于非抗凝试管中，4 ℃过夜后于1000 r/min离心20 min，取血清存于-80 ℃冰箱中。酶联免疫吸附法（ELISA法）应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PLA-2与COX-2水平[5-6]。将纯化的抗体包被微孔板制成固相抗体，随后往包被单抗的微孔中依次加入待测物抗原、生物素化的抗人待测物抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。底物催化成蓝色，并在最终转化成黄色。颜色的深浅和样品中的待测物浓度呈正相关。使用酶标仪测定OD450 nm值。采用标准曲线方程式法计算样品实际浓度。
1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件包对资料进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，相关性分析使用Spearman等级相关分析，ROC曲线确定PLA-2和COX-2的最佳界值，以P<0.05表示差异有统计学意义。 2 结果
2.1 两组不同孕期血清PLA-2与COX-2浓度比较 研究组各孕期血清中PLA-2与COX-2浓度均高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。随着孕期的延长，孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度也随之增加，见表1。
2.2 孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性分析 研究组血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性线性回归方程：PLA-2=51.05-1.08×COX-2（P=0.1450），提示研究组血清PLA-2与COX-2浓度无明显相关性（P>0.05）。
3 讨论
早产一个复杂并常见的妊娠并发症，尚不清楚其病因及发病机制，有研究认为早产与产妇身体情况、生育史、合并症、产科并发症等多项原因有关，而且早产容易引发新生儿死亡，预防难度大[7]。研究表明早产发生的关键是母体产生的免疫内分泌反应[8]。当内分泌激素和细胞因子等的水平发生改变后，母体会对胎儿排斥，最终使得母胎之间的免疫耐受遭到破坏。早产是由母体或胎儿单独、或者两者共同应激而启动的，甾体激素的变化、催产素的活跃、前列腺素的合成、胎儿的影响以及子宫肌层的细胞级的改变等，均作用于子宫，最后完成分娩和生产[9]。
有研究表明，感染、感染引起的胎膜早破及精神因素等引起早产的重要发病机制是前列腺素（Prostaglandin，PG）合成的增加。磷脂酶-A2（PLA-2）和环氧合酶-2（COX-2）是前列腺素合成途径中顺序起作用的重要酶类，PLA-2将花生四烯酸（AA）从膜磷脂中释放到细胞基质后，由COX-2催化AA转变为前列腺素H2（PGH2），随后再由各种特异性前列腺素（PG）合成酶将PGH2进行异构化，从而合成相应的PG[10-12]。PG在分娩发动中起着重要的作用。前列腺素合成途径中的重要酶类，感染产生的各种致炎细胞因子，如羊水中白细胞介素（IL-1、IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等作用于胎膜中的羊膜组织，促进PLA-2和COX-2的表达，从而进一步促进前列腺素的产生[13]。因此，孕妇血清PLA-2和COX-2浓度的变化即可预测前列腺素水平的变化，从而推测孕妇分娩的时间。另外，母体、胎儿处于应激状态影响了早产的发生。有研究表明，分泌型磷脂酶A2（sPLA-2）、胞浆型磷脂酶A2（cPLA-2）均被证实在人类妊娠组织有表达，他们在前列腺素合成第一步中催化膜磷脂，释放花生四烯酸，而分娩时表达上调的是sPLA-2[14]。躯体性或心理性应激反应，比如感染、心理因素和子宫胎盘缺血等，都能在一定程度上促使皮质醇分泌增加，COX-2的上调表达增加前列腺素的合成，诱发宫缩。研究显示COX-2与受精卵的发育、输送及蜕膜化和分娩有关[15]。研究表明，分娩启动中COX-2在前列腺素合成过程中尤为重要[16]。
本研究检测两组孕妇在孕28～30周、孕31～33周和孕34～36周的血清中PLA-2和COX-2的浓度发现，随着孕期的增长，孕妇血清中PLA-2和COX-2浓度均呈现为递增的趋势；研究组各孕期血清中PLA-2和COX-2浓度均显著高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），说明PLA-2和COX-2浓度与早产有一定的关联。通过分析孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性分析发现，血清PLA-2与COX-2浓度之间无明显相关性，所以分析母体的血清中PLA-2与COX-2浓度的测定可以作为预测早产的参考。
对孕产妇有必要做好早产的预防措施。其中包括身心健康，保持愉快的心情，避免精神创伤，预防血压升高，对于已经知道早产史或者子宫畸形的孕妇，孕期里应该特别注意增加营养，孕期要求左侧卧位休息以增加子宫胎盘的血流量，防止自发性子宫收缩。另外对于宫颈内口松弛的孕妇，还需要做子宫颈内口缝合术。在这些护理措施上，通过检测血清中与早产相关的蛋白浓度，做到尽早进行宫内转运，帮助临床医师能及早做出预后和措施，最终保证母子平安。
参考文献
[1]陈倩.第一届国际早产会议纪要[J].中华妇产科杂志，2003，38（3）：190.
[2]丰有吉.妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，2002：88.
[3]薛艳春，朱伟，沈丽，等.测定孕妇血清游离雌三醇含量预测早产的发生[J].中外医疗，2012，32（21）：38-39.
[4]李芳.磷脂酶A2与环氧合酶2在早产发生中的临床意义[D].遵义：遵义医学院，2010.
[5]沈瑾.胚胎先天性神经管缺陷PLA-2，COX-2表达及基因治疗[D].西安：第四军医大学，2010.
[6]熊瑛，杨祖菁.母血浆P-LAP与早产发动关系的相关性临床研究[J].现代妇产科进展，2011，20（9）：722-725.
[7] Edmondson N，Bocking A，Machin G，et al.The prevalence of chronic deciduitis in cases of preterm labor without clinical chorioamnionitis[J].Pediatr Dev Pathol，2009，12（1）：16-21.
[8] Christiaens I，Zaragoza D B，Guilbert L，et al.Inflammatory processes in preterm and term parturition[J].J Reprod Immunol，2008，79（1）：50-57.
[9] Helmer H，Tretzmüller U，Brunbauer M，et al.Production of oxytocin receptor and cytokines in primary uterinesmooth muscle cells cultivated under inflammatory conditions[J].J Soc Gynecol Investig，2002，9（1）：15-21. [10] Park S Y，Ma W，Yoon S N，et al.Phospholipase D1 increases Bcl-2 expression during neuronal differentiation of rat neural stem cells[J].Molecular Neurobiology，2015，51（3）：1089-1102.
[11]沈瑾，马向东，招明高，等.神经管缺陷大鼠模型胚胎形态学改变及PLA-2，COX-2表达[J].现代生物医学进展，2010，10（17）：3216-3220.
[12]奕黎明，陈瑛，杨增明.前列腺素E分子网络对哺乳动物生殖的调控[J].生理科学进展，2005，36（3）：209-214.
[13] Burnett B P，Bitto A，Altavilla D，et al.Flavocoxid inhibits phospholipase A2，peroxidase moieties of the cyclooxygenases（COX），and 5-lipoxygenase，modifies COX-2 gene expression，and acts as an antioxidant[J].Mediators of inflammation，2011，13（11）：682-685.
[14] Friebe H U，Chiao T P，Pank P N，et al.Effect of IL-1β and IL-6 on oxytocin secretion in human uterine smooth muscle cell[J].Am J of Reprod immunol，2001，46（3）：226-231.
[15] Slater D M，Astle S，Bennett P R，et al.Labour is associated with increased expression of type-Ⅱ A secretory phospholipase A2 but not type-Ⅳ cytosolic phospholipase A2 in human myometrium[J].Mol Hum Reprod，2004，10（11）：799-805.
[16] Gustafsson C，Hummerdal P，Matthiesen L，et al.Cytokine secretion in decidual mononuclear cells from term human pregnancy with or without labour：ELISPOT detection of IFN-γ，IL-4，IL-10，TGF-α and TNF-α[J].Reproduc Immunol，2006，71（1）：41-56.
（收稿日期：2014-12-10） （本文编辑：王利）
【关键词】 PLA-2； COX-2； 酶联免疫吸附法； 早产
【Abstract】 Objective： To study the relationship between serum PLA-2，COX-2 and premature.Method：34 pregnant women with threatened premature labor in our hospital from July 2013 to December 2013 were selected as the research group.32 normal pregnant women who had the same gestational age with the research group were selected as the control group at the same time.The levels of PLA-2 and COX-2 in serum of the two groups were detected through enzyme-linked immunosorbent assay.The relationship between the concentrations of PLA-2，COX-2 and premature was analyzed.Result：The concentrations of PLA-2 and COX-2 of different pregnants in the research group were all higher than those in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The concentrations of PLA-2 and COX-2 increased according with the increase of pregnant.The concentrations of these two indexes had no correlation.Conclusion：The concentrations of PLA-2 and COX-2 in maternal serum can be used as an index to predict preterm delivery.
【Key words】 PLA-2； COX-2； ELISA； Premature
早产是产科常见并发症之一，指妊娠满28周至不足37周间分娩，约占分娩总数的5%～15%，近年来发生率有所上升，是引起围产儿死亡的首要原因[1-2]。对早产的病因和治疗等方面的研究在近年来取得巨大成果，但早产的发生率仍有增多，因此降低围生儿死亡率的关键步骤就是早期预测早产的发生[3-4]。目前预测早产的方法有：（1）阴道B型超声检查宫颈内口漏斗形成及宫颈长度情况；（2）血清生化标志物：包括促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、细胞因子、C反应蛋白、游离雌三醇、胎儿游离DNA检测等；（3）生殖道标志物：包括阴道后穹隆棉试纸检测胎儿纤维连接蛋白（fFN）、IL-8、IL-6、中性粒细胞弹性蛋白酶和基质金属蛋白酶等。尚未见到将血清PLA-2和COX-2水平的变化用于预测早产的文献报道。因此，本研究将探讨孕妇血清PLA-2与COX-2水平的变化及其与早产的相关性，以找到一种新的预测早产的方法，旨在为临床预防和治疗早产提供客观依据，现具体报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年7-12月本院收治的34例先兆早产孕妇作为研究组，选择同期同孕龄的32例正常孕妇作为对照组。研究组的入选标准：孕28～36周，宫缩存在1 h以上，宫口开大<2 cm，宫缩>30 s/7～10 min，胎膜完整无明显阴道流血，入院行保胎治疗（伴有妊娠合并症及1 d内有性交者排除在外）。两组年龄、取样孕周及孕次等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法 在各组孕妇知情情况下抽取静脉血4 mL，置于非抗凝试管中，4 ℃过夜后于1000 r/min离心20 min，取血清存于-80 ℃冰箱中。酶联免疫吸附法（ELISA法）应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PLA-2与COX-2水平[5-6]。将纯化的抗体包被微孔板制成固相抗体，随后往包被单抗的微孔中依次加入待测物抗原、生物素化的抗人待测物抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。底物催化成蓝色，并在最终转化成黄色。颜色的深浅和样品中的待测物浓度呈正相关。使用酶标仪测定OD450 nm值。采用标准曲线方程式法计算样品实际浓度。
1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件包对资料进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，相关性分析使用Spearman等级相关分析，ROC曲线确定PLA-2和COX-2的最佳界值，以P<0.05表示差异有统计学意义。 2 结果
2.1 两组不同孕期血清PLA-2与COX-2浓度比较 研究组各孕期血清中PLA-2与COX-2浓度均高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。随着孕期的延长，孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度也随之增加，见表1。
2.2 孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性分析 研究组血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性线性回归方程：PLA-2=51.05-1.08×COX-2（P=0.1450），提示研究组血清PLA-2与COX-2浓度无明显相关性（P>0.05）。
3 讨论
早产一个复杂并常见的妊娠并发症，尚不清楚其病因及发病机制，有研究认为早产与产妇身体情况、生育史、合并症、产科并发症等多项原因有关，而且早产容易引发新生儿死亡，预防难度大[7]。研究表明早产发生的关键是母体产生的免疫内分泌反应[8]。当内分泌激素和细胞因子等的水平发生改变后，母体会对胎儿排斥，最终使得母胎之间的免疫耐受遭到破坏。早产是由母体或胎儿单独、或者两者共同应激而启动的，甾体激素的变化、催产素的活跃、前列腺素的合成、胎儿的影响以及子宫肌层的细胞级的改变等，均作用于子宫，最后完成分娩和生产[9]。
有研究表明，感染、感染引起的胎膜早破及精神因素等引起早产的重要发病机制是前列腺素（Prostaglandin，PG）合成的增加。磷脂酶-A2（PLA-2）和环氧合酶-2（COX-2）是前列腺素合成途径中顺序起作用的重要酶类，PLA-2将花生四烯酸（AA）从膜磷脂中释放到细胞基质后，由COX-2催化AA转变为前列腺素H2（PGH2），随后再由各种特异性前列腺素（PG）合成酶将PGH2进行异构化，从而合成相应的PG[10-12]。PG在分娩发动中起着重要的作用。前列腺素合成途径中的重要酶类，感染产生的各种致炎细胞因子，如羊水中白细胞介素（IL-1、IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等作用于胎膜中的羊膜组织，促进PLA-2和COX-2的表达，从而进一步促进前列腺素的产生[13]。因此，孕妇血清PLA-2和COX-2浓度的变化即可预测前列腺素水平的变化，从而推测孕妇分娩的时间。另外，母体、胎儿处于应激状态影响了早产的发生。有研究表明，分泌型磷脂酶A2（sPLA-2）、胞浆型磷脂酶A2（cPLA-2）均被证实在人类妊娠组织有表达，他们在前列腺素合成第一步中催化膜磷脂，释放花生四烯酸，而分娩时表达上调的是sPLA-2[14]。躯体性或心理性应激反应，比如感染、心理因素和子宫胎盘缺血等，都能在一定程度上促使皮质醇分泌增加，COX-2的上调表达增加前列腺素的合成，诱发宫缩。研究显示COX-2与受精卵的发育、输送及蜕膜化和分娩有关[15]。研究表明，分娩启动中COX-2在前列腺素合成过程中尤为重要[16]。
本研究检测两组孕妇在孕28～30周、孕31～33周和孕34～36周的血清中PLA-2和COX-2的浓度发现，随着孕期的增长，孕妇血清中PLA-2和COX-2浓度均呈现为递增的趋势；研究组各孕期血清中PLA-2和COX-2浓度均显著高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），说明PLA-2和COX-2浓度与早产有一定的关联。通过分析孕妇血清中PLA-2与COX-2浓度的相关性分析发现，血清PLA-2与COX-2浓度之间无明显相关性，所以分析母体的血清中PLA-2与COX-2浓度的测定可以作为预测早产的参考。
对孕产妇有必要做好早产的预防措施。其中包括身心健康，保持愉快的心情，避免精神创伤，预防血压升高，对于已经知道早产史或者子宫畸形的孕妇，孕期里应该特别注意增加营养，孕期要求左侧卧位休息以增加子宫胎盘的血流量，防止自发性子宫收缩。另外对于宫颈内口松弛的孕妇，还需要做子宫颈内口缝合术。在这些护理措施上，通过检测血清中与早产相关的蛋白浓度，做到尽早进行宫内转运，帮助临床医师能及早做出预后和措施，最终保证母子平安。
参考文献
[1]陈倩.第一届国际早产会议纪要[J].中华妇产科杂志，2003，38（3）：190.
[2]丰有吉.妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，2002：88.
[3]薛艳春，朱伟，沈丽，等.测定孕妇血清游离雌三醇含量预测早产的发生[J].中外医疗，2012，32（21）：38-39.
[4]李芳.磷脂酶A2与环氧合酶2在早产发生中的临床意义[D].遵义：遵义医学院，2010.
[5]沈瑾.胚胎先天性神经管缺陷PLA-2，COX-2表达及基因治疗[D].西安：第四军医大学，2010.
[6]熊瑛，杨祖菁.母血浆P-LAP与早产发动关系的相关性临床研究[J].现代妇产科进展，2011，20（9）：722-725.
[7] Edmondson N，Bocking A，Machin G，et al.The prevalence of chronic deciduitis in cases of preterm labor without clinical chorioamnionitis[J].Pediatr Dev Pathol，2009，12（1）：16-21.
[8] Christiaens I，Zaragoza D B，Guilbert L，et al.Inflammatory processes in preterm and term parturition[J].J Reprod Immunol，2008，79（1）：50-57.
[9] Helmer H，Tretzmüller U，Brunbauer M，et al.Production of oxytocin receptor and cytokines in primary uterinesmooth muscle cells cultivated under inflammatory conditions[J].J Soc Gynecol Investig，2002，9（1）：15-21. [10] Park S Y，Ma W，Yoon S N，et al.Phospholipase D1 increases Bcl-2 expression during neuronal differentiation of rat neural stem cells[J].Molecular Neurobiology，2015，51（3）：1089-1102.
[11]沈瑾，马向东，招明高，等.神经管缺陷大鼠模型胚胎形态学改变及PLA-2，COX-2表达[J].现代生物医学进展，2010，10（17）：3216-3220.
[12]奕黎明，陈瑛，杨增明.前列腺素E分子网络对哺乳动物生殖的调控[J].生理科学进展，2005，36（3）：209-214.
[13] Burnett B P，Bitto A，Altavilla D，et al.Flavocoxid inhibits phospholipase A2，peroxidase moieties of the cyclooxygenases（COX），and 5-lipoxygenase，modifies COX-2 gene expression，and acts as an antioxidant[J].Mediators of inflammation，2011，13（11）：682-685.
[14] Friebe H U，Chiao T P，Pank P N，et al.Effect of IL-1β and IL-6 on oxytocin secretion in human uterine smooth muscle cell[J].Am J of Reprod immunol，2001，46（3）：226-231.
[15] Slater D M，Astle S，Bennett P R，et al.Labour is associated with increased expression of type-Ⅱ A secretory phospholipase A2 but not type-Ⅳ cytosolic phospholipase A2 in human myometrium[J].Mol Hum Reprod，2004，10（11）：799-805.
[16] Gustafsson C，Hummerdal P，Matthiesen L，et al.Cytokine secretion in decidual mononuclear cells from term human pregnancy with or without labour：ELISPOT detection of IFN-γ，IL-4，IL-10，TGF-α and TNF-α[J].Reproduc Immunol，2006，71（1）：41-56.
（收稿日期：2014-12-10） （本文编辑：王利）