观察链接蛋白-4(Nectin-4)在人食管癌组织及邻近正常组织的表达，分析其表达水平与食管癌患者临床病理特征及预后的关系。探讨Nectin-4干预对人食管癌细胞株的功能调节作用。
方法采用免疫组织化学染色法检测食管癌组织芯片中94例食管癌和78例相邻癌旁正常组织Nectin-4的表达，采用秩和检验比较食管癌及癌旁正常组织中Nectin-4表达水平的差异，χ2检验分析食管癌组织中Nectin-4表达水平与患者临床病理特征的关系，拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。选用人食管癌细胞株Eca-109和TE-1，经RNA干扰(RNAi)技术构建Nectin-4稳定下调及过表达细胞株，分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、划痕实验及Transwell实验探讨Nectin-4干预对上述食管癌细胞株生物学功能的调节作用。
结果Nectin-4在食管癌组织中高表达，在正常组织中以不表达和低表达为主，在癌组织及癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。肿瘤最大直径≥4.5 cm的食管癌患者其Nectin-4高表达比率高于最大直径<4.5 cm的患者，差异有统计学意义(χ2＝6.385，P<0.05)。T分期为Ⅲ＋Ⅳ的食管癌患者其Nectin-4高表达比率高于TNM分期为Ⅰ＋Ⅱ的食管癌患者，差异有统计学意义(χ2＝5.822，P<0.05)。Nectin-4染色强度与患者其他临床病理特征无相关(P>0.05)。多因素Cox比例风险模型显示，Nectin-4表达水平[风险比(HR)＝1.795，95%可信区间(CI)：1.042～3.092，P<0.05]可作为食管癌患者独立预后因素。经过RNAi及慢病毒转染，选用Eca-109和TE-1成功构建Nectin-4稳定下调表达细胞株LV-Nectin-4-短发卡RNA(shRNA)和Nectin-4过表达细胞株LV-Nectin-4-OE。CCK-8实验显示，LV-Nectin-4-shRNA组细胞的增殖率显著低于LV-NC组细胞(Eca-109，48 h：P<0.01，72 h：P<0.05；TE-1，24 h：P<0.01，48 h：P<0.01，72 h：P<0.01)，LV-Nectin-4-OE组细胞增殖率显著高于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109，48 h：P<0.05，72 h：P<0.05；TE-1，48 h：P<0.01，72 h：P<0.05)。划痕实验显示，LV-Nectin-4-shRNA组细胞迁移能力显著低于LV-NC组(Eca-109，24 h：P<0.05；TE-1，24 h：P<0.01)；LV-Nectin-4-OE组细胞迁移能力显著高于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109，24 h：P<0.01；TE-1，24 h：P<0.05)。Transwell侵袭实验显示，LV-Nectin-4-shRNA组细胞侵袭数量显著低于LV-NC组(Eca-109，P<0.05；TE-1，P<0.01)；LV-Nectin-4-OE组细胞侵袭数量显著高于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109，P<0.01；TE-1，P<0.01)。皮下移植瘤实验证实，敲除Nectin-4表达可以显著抑制肿瘤生长(Eca-109，P<0.01；TE-1，P<0.01)；LV-Nectin-4-shRNA组肿瘤组织重量显著轻于LV-NC组(Eca-109，P<0.05；TE-1，P<0.01)；LV-Nectin-4-OE组肿瘤组织重量显著重于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109，P<0.018；TE-1，P>0.05)。
结论Nectin-4在食管癌组织中高表达，表达水平与食管癌患者肿瘤大小、T分期密切相关，Nectin-4高表达可作为食管癌患者预后评判的独立风险因素，提示Nectin-4参与食管癌的发生与进展。人食管癌细胞中下调Nectin-4表达可抑制细胞活力、迁移和侵袭的能力，上调Nectin-4表达可增强细胞活力、迁移和侵袭的能力。