线性扩增介导的PCR方法用于检测慢病毒载体在白血病细胞基因组中插入位点的可行性

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目前,病毒载体基因转导技术是基因治疗中最为成熟的生物学方法,其中逆转录病毒载体,因其具有可直接整合于宿主细胞基因组并能够长期稳定表达的特点而成为临床基因治疗的核心技术,分析病毒载体在宿主染色体中插入位点的常用方法包括Southern blot、RT-PCR等,这些方法均需要足量含高拷贝数已整合有病毒载体的样本DNA以获取有用的序列信息,且受到靶序列的大小、位置及构象的限制,故其灵敏度较差.目前可用于同时检测低拷贝数、多处未知DNA插入位点旁序列的最精确灵敏的方法是线性扩增介导的PCR(linear amplification-mediated PCR,LAM-PCR)法[1,2],我们探讨了该技术用于分析检测慢病毒载体(lentiviral vector)在人白血病细胞基因组中插入位点旁序列的可行性。

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