人内皮型一氧化氮合成酶基因转染抑制人血管平滑肌细胞增殖及其机制

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sdgxsgl123
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目的 探讨人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)转染抑制人血管平滑肌细胞(HVSMCs)增殖的机制.方法 以AdCMV-heNOS病毒感染复数分别为50、150、250、300、450 MOI,转染HVSMCs,放射免疫法检测转染HVSMCs中的环一磷酸鸟苷(cGMP)的表达变化;Western blot检测血管平滑肌细胞中p21、p27蛋白的变化,流式细胞术分析对细胞周期分布及凋亡的影响.结果 (1)转染120 h,A570值分别为1.410±0.081、1.357±0.150、1.303±0.311、0.995±0.248、0.731±0.101,其中感染复数300 MOI明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖.(2)转染72 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组cGMP的含量分别为(7.91±0.39)、(8.36±0.34)、(12.89±2.06)μnol/L,差异有统计学意义(P<0.01).(3)转染48 h,Westem blot检测转染组p27、p21表达明显上调,而未转染组虽也有p21、p27的表达,但两组差异有统计学意义(P<0.05).(4)无血清转染48 h后血清刺激24 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组G0/G1期分别为(64.23±1.58)%、(64.96±1.36)%、(76.03±2.27)%,差异有统计学意义(P<0.01).(5)转染3 d,第1天,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组细胞凋亡率分别为(4.70±0.56)%、(5.53±0.74)%、(8.53±1.06)%,差异无统计学意义(P>0.05).第3天,细胞凋亡率分别为(5.40±0.62)%、(8.30±0.80)%、(9.30±0.90)%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 heNOS基因转染HVSMCs抑制细胞增殖,通过p21、p27上调导致细胞周期的阻滞,无诱导细胞凋亡.
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