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【摘要】目的：筛选虎尾轮根健脾固胃的有效部位。方法：采用系统溶剂提取法对虎尾轮根进行提取、分离得到不同部位的提取物，并采用大黄所致脾虚模型及饮食失节型脾虚模型，以各组提取液灌胃给药，观察各种提取液对脾虚模型小鼠的影响。结果：虎尾轮根的乙醇提取总浸膏、乙酸乙酯部位、水饱和正丁醇部位可增加脾虚小鼠体质量，提高胸腺和脾脏指数，改善小鼠脾虚症状，具有健脾固胃的功效，对小鼠脾虚模型有较好的抗脾虚作用，其他部位活性较弱。结论：虎尾轮根的总浸膏、乙酸乙酯、水饱和正丁醇部位有较好的抗脾虚的作用。
【关键词】虎尾轮根；提取物；脾虚
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）01-0017-02
虎尾轮为豆科狸尾草属植物长穗猫尾射（Uraria crinita）的全草，主要分布于云南、广东、广西、福建、台湾等省份。据《中药大辞典》、《闽南民间草药》、《台湾民间药》记载，虎尾轮有活血通络、健脾和胃、除湿化痰的功效，用于治疗肺结核、咳嗽、肺痈、吐血、尿血、胃十二指肠溃疡、小儿疳积、白带、关节炎等疾病。虎尾轮在闽南、台湾等地区广泛使用为食疗药材，闽南地区常作药膳，用于小儿脾胃不开、小儿疳积等症；台湾民间用于小儿发育不良之转骨，以及运动伤害和跌打内外伤[1]。虎尾轮根具有理气、化痰、益肾的功效[2]。
课题组前期对虎尾轮根和茎已进行初步化学研究[3-4]，发现虎尾轮根主要含有黄酮类、皂苷、糖类、氨基酸类、酚类、有机酸以及甾体等物质；茎中含有糖类、黄酮及其苷类。但对其固胃健脾的有效成分尚不清晰。研究采用80%乙醇对虎尾轮根进行提取，分离得到不同部位的提取物，并观察各种提取物对大黄所致脾虚模型及食失节型脾虚模型小鼠的影响。
1 仪器与材料
1.1 动物 健康昆明小鼠，清洁级，雌雄各半，体质量（20±2）g，由漳州卫生职业学院机能实验室提供。
1.2 药品与试剂 虎尾轮采自福建漳州市南靖县和溪镇，经漳州卫生职业学院药学系实训中心巫庆珍高级实验师鉴定为豆科Uraria crinita （L.） Desv.ex DC.的根；归脾丸（批号：20140826，九芝堂股份有限公司）；大黄药材（漳州聚善堂药业有限公司）。其余试剂均为分析纯。
1.3 仪器 电子天平AB135-S（十万分之一）（梅特勒，瑞士）；KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；R50-2B 型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；SHB-Ⅲ型水循环式多用真空泵（上海亚荣有限公司）。
2 方法
2.1 供试品的制备 取虎尾轮根粗粉，80%乙醇回流提取3次，提取液减压回收得浸膏，浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取液减压回收溶剂，得石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏和水浸膏。灌胃前分别用0.5% CMC-Na溶液配制成适宜浓度，分别灌胃给药10ml/kg。
2.2 大黄[2，5，6]所致脾虚模型的建立
2.2.1 造模 将80只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、醇提组、石油醚组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组、水组，每组10只。分别记录每只动物体质量，适应性正常饲养。除正常组外，各组灌胃给予大黄水煎液（0.5g/10g），连续8d；正常组给予同体积蒸馏水。最后一次灌胃大黄水煎液后，记录各组小鼠体质量。
2.2.2 给药 第9天起，正常对照组与模型组给予同体积蒸馏水；各提取部位组和醇提取组给予1.2g生药/（kg·d）；阳性组灌胃给予归脾丸0.064g/（kg·d）；连续给药7d。
2.2.3 肠推进率的测定 各组动物最后一次给药前再次记录各组小鼠体质量，记录完毕后禁食不禁水24h，试验时空白组给予墨汁，其他组以墨汁稀释药物，按0.3ml/10g体质量灌胃，30min后颈部脱臼处死，迅速解剖取出肠道，用直尺量取幽门至墨汁前沿的距离作为在肠道中的推进距离，从幽门至回盲部的总长度作为小肠总长度，计算推进率，推进率（%）=墨汁在小肠内推进距离（cm）/小肠总长度（cm）×100%。
2.2.4 胸腺系数和脾脏系数的测定 将处死后的小鼠取出胸腺与脾脏，称体质量，计算脏器系数。
2.3 饮食失节型脾虚模型的建立[7]
2.3.1 造模 将80只小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组（归脾丸组）、醇提组（总膏组）、石油醚组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组、水浸膏组，每组10只。分别记录每只动物体质量，适应性正常饲养。除正常组外，各组每天灌胃给予精炼猪油脂（0.2ml/10g），同时喂食卷心菜，连续8d；正常组给予同体积蒸馏水。
2.3.2 给药 第9天起，正常对照组与模型组给予同体积蒸馏水；各提取部位组和总膏组给予1.2g生药/（kg·d）；阳性对照组灌胃给予归脾丸0.064g/（kg·d）；连续给药7d。
2.3.3 一般观察以及体重测量 观察并记录小鼠活动、饮食、体形变化及泄泻、纳呆、毛色等情况。每天灌胃前测体质量。
2.4 统计方法 数据采用SPSS 17.0统计软件做统计分析，计量资料用（x[TX-*3]±s）表示，行t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 对大黄所致小鼠脾虚模型的影响
3.1.1 对小鼠肠推进率的影响 大黄水煎液灌胃造模后，模型组与正常对照组相比较，小鼠大肠推进距离变长，推进率增加；给药组均能不同程度地降低脾虚小鼠的肠推进距离，乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组组的肠推进距离降低较为显著（P<0.05）。结果表明，造模后小鼠推进率增加，乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可以明显降低推进率，见表1。 3.1.2 对小鼠胸腺系数和脾脏系数的影响 模型组小鼠自行恢复一周后，胸腺指数和脾脏指数略有恢复，但显著低于正常对照组（P<0.05）；与模型组相比，各给药组胸腺指数和脾脏指数都有升高的趋势，而乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组增加较为明显（P<0.05）。结果表明，造模后小鼠胸腺指数、脾脏指数降低；乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可以明显增加胸腺指数和脾脏指数。见表2。
3.2 对饮食失节型脾虚模型的影响 小鼠给予喂食精炼猪油和卷心菜后，第3天开始出现泄泻，为黄色溏软便；继续喂食，第5天开始出现反应迟钝，行动迟缓，形体消瘦，被毛稀疏、散乱等症状。按“2.3.2”下方法给药，给药3d后，各给药组小鼠饮食量逐渐增加，体重略增，大便趋于正常，给药结束后大便成型。而模型组小鼠自行恢复，状况参差不齐，恢复程度和速度弱于给药组。结果见表3。
4 讨论
目前，造脾虚模型的方法各异，本文采用大黄苦寒泻下法和饮食失节法复制脾虚模型。大黄苦寒泻下法方法简单，易于操作，用大黄水煎液灌胃，动物出现便溏、形体消瘦、毛色枯槁等症状与临床脾虚症状相同，说明实验建立的脾虚模型成功。胸腺和脾脏是人体重要的免疫器官，胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况，间接反映了机体的免疫水平[8]，实验中以肠墨汁推进率、胸腺指数和脾脏指数为考察指标。结果表明，虎尾轮根乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组给药后能明显降低小鼠肠推进率，提高胸腺指数和脾脏指数。将小鼠喂食精炼猪油和卷心菜，复制饮食失节型脾虚模型，实验动物出现反应迟钝、行动迟缓、形体消瘦、被毛稀疏、散乱等症状，说明实验建立的脾虚模型成功；乙酸乙酯和水饱和正丁醇组给药后小鼠体质量增加较明显，大便成型，具有改善脾虚症状的功能。
实验结果表明，虎尾轮根提取物可增加脾虚小鼠体质量，提高胸腺和脾脏指数，改善小鼠脾虚症状，具有健脾固胃的功效，而乙酸乙酯和水饱和正丁醇部位效果更优。实验中，虎尾轮根浸膏得率为7.3%，萃取后，各提取液的得率分别为石油醚层为0.25%、乙酸乙酯层为0.4%、水饱和正丁醇层为0.8%、水层为3.5%。虎尾轮根含有黄酮类、皂苷类成分，极性较大，有效物质主要存在于正丁醇层和乙酸乙酯层，为虎尾轮药用价值的研究奠定实验基础。
参考文献
[1]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006：1336 -1337.
[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：1006.
[3]陈素慧，高佳，巫庆珍，等.虎尾轮根化学成分预试验[J].天津药学，2011，23（2）：9-10.
[4]黄建军，高佳，巫庆珍，等.虎尾轮根和茎的化学成分比较[J].北方药学，2012，9（10）：36.
[5]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002.
[6]李柏群，陈绍成，彭腾，等.风芍六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的药效学研究[J].中成药，2012，34（11）：2229-2233.
[7]周可军，杨振华，王希锋，等.康胃颗粒对实验性脾虚大鼠的健脾作用[J].现代中西医结合杂志，2007，16（19）：2652-2653.
[8]王燕燕，张锦文，郭洁茹，等.虎尾轮根提取物对肾阳虚模型小鼠的影响[J].医药导报，2011，30（3）：292-294.
（收稿日期：2015.10.08）
【关键词】虎尾轮根；提取物；脾虚
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）01-0017-02
虎尾轮为豆科狸尾草属植物长穗猫尾射（Uraria crinita）的全草，主要分布于云南、广东、广西、福建、台湾等省份。据《中药大辞典》、《闽南民间草药》、《台湾民间药》记载，虎尾轮有活血通络、健脾和胃、除湿化痰的功效，用于治疗肺结核、咳嗽、肺痈、吐血、尿血、胃十二指肠溃疡、小儿疳积、白带、关节炎等疾病。虎尾轮在闽南、台湾等地区广泛使用为食疗药材，闽南地区常作药膳，用于小儿脾胃不开、小儿疳积等症；台湾民间用于小儿发育不良之转骨，以及运动伤害和跌打内外伤[1]。虎尾轮根具有理气、化痰、益肾的功效[2]。
课题组前期对虎尾轮根和茎已进行初步化学研究[3-4]，发现虎尾轮根主要含有黄酮类、皂苷、糖类、氨基酸类、酚类、有机酸以及甾体等物质；茎中含有糖类、黄酮及其苷类。但对其固胃健脾的有效成分尚不清晰。研究采用80%乙醇对虎尾轮根进行提取，分离得到不同部位的提取物，并观察各种提取物对大黄所致脾虚模型及食失节型脾虚模型小鼠的影响。
1 仪器与材料
1.1 动物 健康昆明小鼠，清洁级，雌雄各半，体质量（20±2）g，由漳州卫生职业学院机能实验室提供。
1.2 药品与试剂 虎尾轮采自福建漳州市南靖县和溪镇，经漳州卫生职业学院药学系实训中心巫庆珍高级实验师鉴定为豆科Uraria crinita （L.） Desv.ex DC.的根；归脾丸（批号：20140826，九芝堂股份有限公司）；大黄药材（漳州聚善堂药业有限公司）。其余试剂均为分析纯。
1.3 仪器 电子天平AB135-S（十万分之一）（梅特勒，瑞士）；KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；R50-2B 型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；SHB-Ⅲ型水循环式多用真空泵（上海亚荣有限公司）。
2 方法
2.1 供试品的制备 取虎尾轮根粗粉，80%乙醇回流提取3次，提取液减压回收得浸膏，浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取液减压回收溶剂，得石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏和水浸膏。灌胃前分别用0.5% CMC-Na溶液配制成适宜浓度，分别灌胃给药10ml/kg。
2.2 大黄[2，5，6]所致脾虚模型的建立
2.2.1 造模 将80只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、醇提组、石油醚组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组、水组，每组10只。分别记录每只动物体质量，适应性正常饲养。除正常组外，各组灌胃给予大黄水煎液（0.5g/10g），连续8d；正常组给予同体积蒸馏水。最后一次灌胃大黄水煎液后，记录各组小鼠体质量。
2.2.2 给药 第9天起，正常对照组与模型组给予同体积蒸馏水；各提取部位组和醇提取组给予1.2g生药/（kg·d）；阳性组灌胃给予归脾丸0.064g/（kg·d）；连续给药7d。
2.2.3 肠推进率的测定 各组动物最后一次给药前再次记录各组小鼠体质量，记录完毕后禁食不禁水24h，试验时空白组给予墨汁，其他组以墨汁稀释药物，按0.3ml/10g体质量灌胃，30min后颈部脱臼处死，迅速解剖取出肠道，用直尺量取幽门至墨汁前沿的距离作为在肠道中的推进距离，从幽门至回盲部的总长度作为小肠总长度，计算推进率，推进率（%）=墨汁在小肠内推进距离（cm）/小肠总长度（cm）×100%。
2.2.4 胸腺系数和脾脏系数的测定 将处死后的小鼠取出胸腺与脾脏，称体质量，计算脏器系数。
2.3 饮食失节型脾虚模型的建立[7]
2.3.1 造模 将80只小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组（归脾丸组）、醇提组（总膏组）、石油醚组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组、水浸膏组，每组10只。分别记录每只动物体质量，适应性正常饲养。除正常组外，各组每天灌胃给予精炼猪油脂（0.2ml/10g），同时喂食卷心菜，连续8d；正常组给予同体积蒸馏水。
2.3.2 给药 第9天起，正常对照组与模型组给予同体积蒸馏水；各提取部位组和总膏组给予1.2g生药/（kg·d）；阳性对照组灌胃给予归脾丸0.064g/（kg·d）；连续给药7d。
2.3.3 一般观察以及体重测量 观察并记录小鼠活动、饮食、体形变化及泄泻、纳呆、毛色等情况。每天灌胃前测体质量。
2.4 统计方法 数据采用SPSS 17.0统计软件做统计分析，计量资料用（x[TX-*3]±s）表示，行t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 对大黄所致小鼠脾虚模型的影响
3.1.1 对小鼠肠推进率的影响 大黄水煎液灌胃造模后，模型组与正常对照组相比较，小鼠大肠推进距离变长，推进率增加；给药组均能不同程度地降低脾虚小鼠的肠推进距离，乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组组的肠推进距离降低较为显著（P<0.05）。结果表明，造模后小鼠推进率增加，乙醇提取总膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可以明显降低推进率，见表1。 3.1.2 对小鼠胸腺系数和脾脏系数的影响 模型组小鼠自行恢复一周后，胸腺指数和脾脏指数略有恢复，但显著低于正常对照组（P<0.05）；与模型组相比，各给药组胸腺指数和脾脏指数都有升高的趋势，而乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组增加较为明显（P<0.05）。结果表明，造模后小鼠胸腺指数、脾脏指数降低；乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、正丁醇组可以明显增加胸腺指数和脾脏指数。见表2。
3.2 对饮食失节型脾虚模型的影响 小鼠给予喂食精炼猪油和卷心菜后，第3天开始出现泄泻，为黄色溏软便；继续喂食，第5天开始出现反应迟钝，行动迟缓，形体消瘦，被毛稀疏、散乱等症状。按“2.3.2”下方法给药，给药3d后，各给药组小鼠饮食量逐渐增加，体重略增，大便趋于正常，给药结束后大便成型。而模型组小鼠自行恢复，状况参差不齐，恢复程度和速度弱于给药组。结果见表3。
4 讨论
目前，造脾虚模型的方法各异，本文采用大黄苦寒泻下法和饮食失节法复制脾虚模型。大黄苦寒泻下法方法简单，易于操作，用大黄水煎液灌胃，动物出现便溏、形体消瘦、毛色枯槁等症状与临床脾虚症状相同，说明实验建立的脾虚模型成功。胸腺和脾脏是人体重要的免疫器官，胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况，间接反映了机体的免疫水平[8]，实验中以肠墨汁推进率、胸腺指数和脾脏指数为考察指标。结果表明，虎尾轮根乙醇提取总浸膏组、乙酸乙酯组、水饱和正丁醇组给药后能明显降低小鼠肠推进率，提高胸腺指数和脾脏指数。将小鼠喂食精炼猪油和卷心菜，复制饮食失节型脾虚模型，实验动物出现反应迟钝、行动迟缓、形体消瘦、被毛稀疏、散乱等症状，说明实验建立的脾虚模型成功；乙酸乙酯和水饱和正丁醇组给药后小鼠体质量增加较明显，大便成型，具有改善脾虚症状的功能。
实验结果表明，虎尾轮根提取物可增加脾虚小鼠体质量，提高胸腺和脾脏指数，改善小鼠脾虚症状，具有健脾固胃的功效，而乙酸乙酯和水饱和正丁醇部位效果更优。实验中，虎尾轮根浸膏得率为7.3%，萃取后，各提取液的得率分别为石油醚层为0.25%、乙酸乙酯层为0.4%、水饱和正丁醇层为0.8%、水层为3.5%。虎尾轮根含有黄酮类、皂苷类成分，极性较大，有效物质主要存在于正丁醇层和乙酸乙酯层，为虎尾轮药用价值的研究奠定实验基础。
参考文献
[1]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006：1336 -1337.
[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：1006.
[3]陈素慧，高佳，巫庆珍，等.虎尾轮根化学成分预试验[J].天津药学，2011，23（2）：9-10.
[4]黄建军，高佳，巫庆珍，等.虎尾轮根和茎的化学成分比较[J].北方药学，2012，9（10）：36.
[5]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002.
[6]李柏群，陈绍成，彭腾，等.风芍六君子汤治疗脾虚腹泻型肠易激综合征的药效学研究[J].中成药，2012，34（11）：2229-2233.
[7]周可军，杨振华，王希锋，等.康胃颗粒对实验性脾虚大鼠的健脾作用[J].现代中西医结合杂志，2007，16（19）：2652-2653.
[8]王燕燕，张锦文，郭洁茹，等.虎尾轮根提取物对肾阳虚模型小鼠的影响[J].医药导报，2011，30（3）：292-294.
（收稿日期：2015.10.08）