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目的:构建3* Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因c DNA全长,并将其克隆至含有3* Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达。同时利用共聚焦激光显微镜观察3* Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白。结果:hPlk4