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目的 优化银染差异显示(DD-PCR)条件和二次PCR扩增参数,建立非放射性DD-PCR方法。方法 采用单碱基锚定引物与10碱基随机引物组合,对大细胞肺癌细胞系801-D总RNA模板进行DDRT-PCR,行小体积测序胶电泳,银染呈现扩增产物,在胶上直接切取差异条带后,进行再扩增。结果 银染DD-PCR条件经最适化后,可显著足够数量的条带。随机引物5’末端出现GC扩增效果明显优于3’末端GC的出现,银染DD-PCR中dNTPs需要高浓度。差异条带再扩增时,低浓度上下游引物可防止非特异性扩增。结论 银