【摘 要】
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从污水中分离出一株以咔唑为惟一碳源和氮源生长的菌株PJ3,用16S rDNA鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp),构建了PJ3菌株基因组文库并获得一株阳性克隆JM109(pUCW402).通过GenSCA
【机 构】
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东北师范大学遗传与细胞研究所; 东北师范大学遗传与细胞研究所 长春130024吉林农业大学生命科学学院长春130118; 长春130024;
【基金项目】
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中国-瑞典国际合作项目(批准号:AM15B12);长江学者和高校创新团队(批准号:IRT0519);高等学校学科创新引智计划(批准号:B07017);国家植物转基因中试与产业化基地(吉林)(批准号:JY03-B-17);长春市科技局国际合作项目资助
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从污水中分离出一株以咔唑为惟一碳源和氮源生长的菌株PJ3,用16S rDNA鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp),构建了PJ3菌株基因组文库并获得一株阳性克隆JM109(pUCW402).通过GenSCAN软件和BLAST分析发现,在插入pUCW402的外源片段(3360bp)中存在一个由933bp片段编码的2,3-二羟基联苯双加氧酶基因.进化分析表明,从PJ3来源的2,3-二羟基联苯双加氧酶在进化树上形成一个独立的分支.Southern杂交进一步证实,编码该酶的基因定位于节杆菌PJ3的基因组DNA上.为了鉴定该基因的生物学功能,构建了BL21(pETW-8)重组菌株.与菌株JM109(pUCW402)和PJ3相比,2,3-二羟基联苯双加氧酶的表达水平在BL21(pETW-8)中最高.酶活分析表明,2,3-二羟基联苯双加氧酶不具有绝对专一性,对2,3-二羟基联苯的催化能力高于邻苯二酚.因此推测PJ3菌株对芳香族化合物降解过程中,2,3-二羟基联苯双加氧酶主要负责催化双环化合物的降解.
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