【摘 要】
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目的:探究胃癌组织中miR-27b与同源盒蛋白HOXB8的表达水平,及两者调控人胃癌干细胞样特性的机制.方法:收集本院30例胃癌组织及对应癌旁正常组织,实时荧光定量PCR检测组织中miR-27b、HOXB8表达差异,生物信息学工具TargetScan7.2和双荧光素酶报告基因技术预测验证miR-27b与HOXB8的靶向关系;免疫磁珠分选法从胃癌细胞株SGC-7901中分选出胃癌干细胞,利用脂质体介导法将miR-27b mimic及阴性对照(miR-27b NC)转染至胃癌干细胞,实时荧光定量PCR检测转染
【机 构】
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海南医学院第一附属医院普通外科, 海南 海口 570102
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目的:探究胃癌组织中miR-27b与同源盒蛋白HOXB8的表达水平,及两者调控人胃癌干细胞样特性的机制.方法:收集本院30例胃癌组织及对应癌旁正常组织,实时荧光定量PCR检测组织中miR-27b、HOXB8表达差异,生物信息学工具TargetScan7.2和双荧光素酶报告基因技术预测验证miR-27b与HOXB8的靶向关系;免疫磁珠分选法从胃癌细胞株SGC-7901中分选出胃癌干细胞,利用脂质体介导法将miR-27b mimic及阴性对照(miR-27b NC)转染至胃癌干细胞,实时荧光定量PCR检测转染后胃癌干细胞中miR-27b表达,Western blot检测转染后胃癌干细胞中HOXB8蛋白表达,CCK-8法检测胃癌干细胞活性,EdU实验检测胃癌干细胞增殖,细胞成球实验和细胞克隆形成实验检测胃癌干细胞自我更新能力.结果:胃癌组织中miR-27b的表达水平高于癌旁正常组织,而HOXB8则低于癌旁正常组织(P<0.01);miR-27b与HOXB83\'-UTR在特定区域内存在碱基互补,miR-27b mimic和WT-HOXB83\'-UTR重组质粒共转染的细胞相对荧光值较miR-27b NC和WT-HOXB83\'-UTR重组质粒共转染的细胞降低(P<0.01);分选后得到高纯度CD44+标记的胃癌干细胞,并成功转染miR-27b mimic至胃癌干细胞;与空白对照组比较,miR-27b mimic组胃癌干细胞内miR-27b表达升高(P<0.01),HOXB8蛋白表达下降(P<0.01),细胞活性下降(P<0.01),EdU标记的阳性细胞减少(P<0.01),细胞成球个数少,球体积变小,细胞克隆形成数目减少(P<0.01).结论:胃癌组织中miR-27b表达降低、HOXB8表达增高,miR-27b通过靶向沉默HOXB8表达调控胃癌干样细胞的增殖与自我更新能力.
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