结核分枝杆菌Rv0859基因的克隆、表达、纯化及蛋白的亚细胞定位

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本研究体外克隆了结核分枝杆菌Rv0859基因,融合表达并纯化了Rv0859蛋白。首先提取H37Rv标准菌株中的基因组DNA,设计Rv0859基因两端的引物,以H37Rv基因纽DNA为模板通过PCR方法扩增Rv0859基因。用HindIII和BamHI两种限制性内切酶双切Rv0859基因,T4连接酶连接到pET30载体上,再转入大肠杆菌JFll25中,经过筛选鉴定后抽提质粒测序,得到重组正确载体,转化到表达宿主大肠杆菌BL21中。用IPTG进行诱导表达,通过聚丙酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)TL质谱鉴定重
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