【摘 要】
：
本试验以永生化奶牛乳腺上皮细胞系为模型,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关基因的表达,旨在探讨亮氨酸和组氨酸通
【机 构】
：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室,甘肃农业大学动物科学技术学院,农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、动物营养学国家重点实验室
【基金项目】
：
国家重点基础研究发展计划（2011CB100805）；现代农业产业技术体系专项资金（nycytx-04-01）；中国农业科学院科技创新工程
论文部分内容阅读
本试验以永生化奶牛乳腺上皮细胞系为模型,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关基因的表达,旨在探讨亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号通路影响酪蛋白合成的机制。以厄尔平衡溶液代替培养基,并设其为阴性对照,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法检测永生化奶牛乳腺上皮细胞12和24h的增殖;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测4个酪蛋白编码基因和8个mTOR信号通路相关基因mRNA表达量。结果表明:分别添加不同浓度亮氨酸或组氨酸12和24h,细胞增殖趋势一致;与阴性对照组相比,分别添加0.15~5.40mmol/L亮氨酸或0.15~9.60mmol/L组氨酸,永生化奶牛乳腺上皮细胞的数量均增加。与阴性对照组相比,当分别添加0.45~10.80mmol/L亮氨酸6h时,αs1-酪蛋白(CSN1S1)、αs2-酪蛋白(CSN1S2)和κ-酪蛋白(CSN3)基因表达均显著上调(P<0.05)。当添加0.15~4.80mmol/L组氨酸6h时,CSN1S1、β-酪蛋白(CSN2)和CSN3基因表达均显著上调(P<0.05)。在试验组中,当亮氨酸浓度为1.35mmol/L时,mTOR信号通路相关基因mTOR、mTOR调控蛋白(raptor)、mTOR复合物1中的绑定蛋白(GβL)、信号下游因子真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)和真核细胞翻译延伸因子2(eEF2)基因表达量最高。而核糖体S6蛋白激酶(S6K1)基因的表达量随着亮氨酸浓度的增加而减少。当添加组氨酸时,下游信号因子4EBP1、eEF2、真核翻译起始因子4E(EIF4E)和核糖体蛋白S6(rps6)基因的表达量随着组氨酸浓度的增加而增加,mTOR基因的表达量随着组氨酸浓度的增加而减少。在试验组中,GβL的表达量在组氨酸的浓度达到4.80mmol/L时最高;S6K1基因表达量在组氨酸的浓度达到1.20mmol/L时最高。综上所述,在乳腺上皮细胞中,亮氨酸和组氨酸能通过mTOR信号通路促进酪蛋白合成相关基因的表达。
其他文献
本研究分析了共轭亚油酸（CLA）对C2C12肌细胞生脂转分化和生肌分化的影响。分别培养并诱导C2C12鼠源肌细胞生脂转分化和正常的生肌分化,同时分别使用终浓度为50μmol/L的c9,t11-
本试验旨在比较饲粮纤维水平对杜洛克仔猪、高黎贡山仔猪生产性能、小肠形态学、小肠黏膜金属硫蛋白1（ MT1）和组织急性期蛋白（ APPs）基因表达的影响。选用35日龄高黎贡山断奶仔猪
在半纯化饲料配方的基础上,分别设计6个α-亚麻酸含量（0.02%、0.55%、1.08%、1.60%、2.13%、2.65%）、6个亚油酸含量（0.86%、1.29%、1.73%、2.16%、2.59%、3.03%）,以亚麻籽油、玉
本试验旨在研究饲粮中添加姜黄渣对蛋鸡生产性能、蛋品质及蛋黄中脂肪、胆固醇和丙二醛(MDA)含量的影响。试验选用46周龄健康产蛋期罗曼褐蛋鸡384羽,随机分成4个组,每组6个重
本试验旨在研究饲粮蛋氨酸水平对30~38周龄临武鸭生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响,以确定临武鸭产蛋高峰期蛋氨酸的需要量。选取体重相近、健康状况良好的临武鸭200羽,
本试验旨在研究妊娠后期宫内生长受限（IUGR）对蒙古绵羊胎儿肝脏脂类代谢能力的影响。选择体重相近、2～3胎次、经同期发情且同期受孕、健康的蒙古绵羊24只,在妊娠90d时选择6只母
本试验旨在研究不同来源粗饲料发酵特性及对微生物细胞膜界面物理化学特性的影响。以小麦秸、玉米秸、水稻秆、苜蓿和桂牧一号为试验材料,采用体外发酵技术,研究不同粗饲料发
本试验旨在测定2~3周龄天府肉鸭的净能(NE)需要量。选取7日龄天府肉鸭300只,其中50只随机分为自由采食组和15%、25%、35%、45%限饲组,进行代谢试验,测定不同饲喂水平下饲粮的
本试验通过与未包被氧化锌（ ZnO）对比,考察包被氧化锌（ C-ZnO）对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、营养物质表观消化率影响,旨在研究C-ZnO取代传统ZnO的效果,对生产实践中减少ZnO
本试验旨在研究饲粮中添加葡萄原花青素（GPC）对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响。选用350只1日龄科宝-500（Cobb-500）健康肉仔鸡（公雏）,随机分为5个组,每组7个重