【摘 要】
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基于乙醇(EtOH)/乙醇脱氢酶(ADH)/氧化型辅酶I(NAD+)催化反应体系,建立了一种用于ADH活性测定的循环催化流动分析法(RCFA),并优选该测定体系的实验条件,得到如下参数:Tris-HC
【机 构】
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四川大学化学工程学院,四川大学华西基础医学与法医学院
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基于乙醇(EtOH)/乙醇脱氢酶(ADH)/氧化型辅酶I(NAD+)催化反应体系,建立了一种用于ADH活性测定的循环催化流动分析法(RCFA),并优选该测定体系的实验条件,得到如下参数:Tris-HCl缓冲液浓度(pH 8.9)为0.1 mol/L,EtOH的浓度为15.6 mol/L,NAD+浓度为9.0 mmol/L,ADH用量20μL/次,反应液流速为0.98 mL/min,反应液体积为2 mL;ADH的测定范围为0.6～50 U/L,检出限为0.14 U/L,相对标准偏差≤1.3%(n=11)。RCFA法具有测定过程简便、快速、自动化特点,能对ADH催化反应过程进行连续循环检测,可对ADH活性变化实现动态研究。RCFA法使反应液循环不但节省了大量的试剂和酶量、降低了测定成本,而且循环测定时不存在人为误差,提高了测定结果的准确度。
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