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摘要：对发病鸡病料进行大肠杆菌病原菌的采集分离鉴定，并进行动物试验及药敏试验。结果表明，该菌为革兰氏阴性短小杆菌，为致病性大肠杆菌;药敏试验显示沙拉噤吹对该菌全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头抱噢味和卡那霉素庆大霉素部分敏感，其他抗菌药物完全没有抑制效果。
关键词：鸡大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验中图分类号：TU文献标识码：A文章编号：（2020）-02-263
鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型菌株所引起的-类传染病的总称。它是条件性致病菌，只有-些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，该病的临诊
病型复杂多样，包括大肠埃希氏菌性败血症、气囊炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、关节炎、挤炎、眼炎、肠炎、脑病、肿头综合征等许多病型。该病常易成为其他疾病的并发病或继发病，各种应激特别是环境卫生及饲养管理条件不良，均可加剧该病的发生。大最抗生素长期使用和滥用，导致耐药菌珠的出现，使药物的控制难度越来越大，同时药物的残留也直接影响到蛋、肉鸡食品的安全。鸡大肠杆菌病给养鸡业的发展带来了巨大的经济损失。能否有效防治鸡大肠杆菌病，已成为决定养鸡业成败的关键问题。因此本试验通过对发病鸡进行大肠杆菌的分离鉴定、药敏试验和动物试验，为该病的有效防治提供依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1药品与试剂
药敏试纸、普通肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基、草酸按结品紫、革兰氏稹液、石炭酸复红染液，革兰氏染色剂均由河南科技学院临床兽医学实验室提供;硫化氢、葡萄糖蛋白陈水、蛋白脉水、庶糖、尿素、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、拧檬酸盐、棉子糖、山梨醇和甘露醇12种细菌微量生化反应管，购自杭州天河微生物试剂有限公司。
1.1.2仪器设备
HG1Ol-2型电热鼓风干燥箱，南京实验仪厂;HH？B11型电热恒温培养箱，厦门建红医疗器械厂;OLYMPWS-CH型显微镜。
1.1.3病料来源
由河南科技学院兽医院提供的初步确诊为大肠杆菌病病鸡4家病料。主要表现为急性败血症型、心包炎、输卵管腹膜炎、肝周炎、肠炎和气囊炎6等种病型。
1.1.4实验动物
健康小白鼠20只，体重20-25g，由河南科技学院临床兽医学实验室提供。
1.2方法
1.2.l分离培养
无菌采取濒死鸡和死亡24h以内具有败血症、心包炎、肝周炎等病理变化的鸡心脏、肝脏、脾脏，直接划线接种于麦康凯培养基，37'C培养24h，观察菌落生长情况。在麦康凯培养基上挑取宜径I-3mm桃红、粉红色的露
珠状菌落，分别划线接种于普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、普通营养肉汤培养基中，37'C培养24h，进行观察;挑取典型菌落接种于普通琼脂斜面，37'C培养24h，以备生化试验;同时进行革兰氏染色镜检观察菌体形态。
1.1.2形态观察
挑取麦康凯培养基上生长的红色菌落、伊红美蓝平板上的暗黑色带金属光泽的菌落，涂片进行革兰氏染色，光学显微镜镜检观察菌体形态。
1.2.3生化试验
将分离纯化的细菌在无菌条件下进行糖发酵试验、甲基红试验、V-P试验、P5I噪试验、硫化氢试验、尿素酶试验、袧檄酸盐利用试验检测。
1.2.4致病性试验
菌液制备：将分离荫接种于营养肉汤，于温度37培养20h，结果呈均匀混浊，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌环。
动物试验：20只小白鼠分成2组，每组10只。A组为试验组，用鸡大肠杆菌肉汤培养物接种，腹腔注射0.2ml/只;B组为对照组，腹腔注射灭菌生理盐水0.2ml/只。注射后每隔-段时间观察1次，连续观察7天。剖检病、死鼠，取死鼠的肝脏进行涂片染色镜检，冉将其接种于麦康凯琼脂，挑取可疑菌落进行分离培养，进行观察。
1.2.5药敏试验药敏
贴上纸片后置于37'C培养24h后观察结果并测盘抑菌圈大小。
判定标准：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感;抑菌圈直径在10～15mm之间为中度敏感;抑菌圈直径小于10mm为耐药l气，
2结果与分析
2.1分离培养结果
分离菌在麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为I.5-2.5mm的小菌落;在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落;在普通琼脂斜面上为灰白色菌落;在普通肉汤中呈均匀浑浊，管底有灰白色沉淀，振荡呈云雾状散开，并有粪臭味。
2.1形态学观察结果
革兰氏染色镜检，可见到革兰氏阴性，两端钝圆，长约1.0-3.0mm的短小杆菌，多单在，偶有2个菌体相连，无芽孢。
2.2致病性试验结果
A组4只小鼠6h内死亡，6只24h内死亡。病理剖检可见肝脏肿大，有出血点坏死点;肠严重鼓气，心包淤血，肺出血，脾脏淤血。采取死亡小鼠心血、肝和脾接种在普通琼脂平板及普通肉汤，37'C培养20h，有细菌生长。革兰氏染色及生化鉴定表明此菌与接种细菌为同种细菌。说明该菌对小鼠具有较强的致病力。B组饲养7d后全部存活，剖检未见病变。
2.3药敏试验结果
分离的菌株对沙拉磋吹全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头玸磋吹和卡那霉素、庆大霉素部分敏感，其他抗菌药物完全没有抑制效果。
3讨论
试验的病料均是从具有心包炎、肝周炎、气囊炎等病理特征的病死鸡身上采集，进行病原菌的分离培养、生化鉴定、动物试验和药敏试验，共分离到4株致病性大肠杆菌，均对沙拉噢吐敏感。药敏试验结果显示分离菌对沙拉噢吹全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头抱磋吹和卡那霉素、庆大霉素部分敏感，对其他抗菌药物均不敏感。说明当前鸡大肠杆菌的耐药谱较广。不过本次试验由于时间紧，菌株少所得結果有-定的片面性。
引发本病的主要原因是温度过高过低或温差过大;其次是由于鸡场长期大昼使用抗生素，不但破坏了肠道正常的菌群关系，而且使致病性大肠杆菌对多种抗菌药产生耐药性;另外，大型栠约化养殖场饲养密度过大，通风换气不良，饲管用具及环境消毒不彻底是加速本病流行的因。素对于本病的防治应注重预防，加强饲养管理，改善饲喂环境，同时注意免疫，用药注意产生耐药性和药物残留的现象正“。
参考文献
[1]胡桂学.兽医微生物实验教程[M].北京：中国衣业大学出版杜，2006：35-38.
[2]孟志敏，李连缺，米同国，等成鸡大肠杆菌病流行情况的调查[J].中国家禽，1999（4）：14.
关键词：鸡大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验中图分类号：TU文献标识码：A文章编号：（2020）-02-263
鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型菌株所引起的-类传染病的总称。它是条件性致病菌，只有-些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，该病的临诊
病型复杂多样，包括大肠埃希氏菌性败血症、气囊炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、关节炎、挤炎、眼炎、肠炎、脑病、肿头综合征等许多病型。该病常易成为其他疾病的并发病或继发病，各种应激特别是环境卫生及饲养管理条件不良，均可加剧该病的发生。大最抗生素长期使用和滥用，导致耐药菌珠的出现，使药物的控制难度越来越大，同时药物的残留也直接影响到蛋、肉鸡食品的安全。鸡大肠杆菌病给养鸡业的发展带来了巨大的经济损失。能否有效防治鸡大肠杆菌病，已成为决定养鸡业成败的关键问题。因此本试验通过对发病鸡进行大肠杆菌的分离鉴定、药敏试验和动物试验，为该病的有效防治提供依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1药品与试剂
药敏试纸、普通肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基、草酸按结品紫、革兰氏稹液、石炭酸复红染液，革兰氏染色剂均由河南科技学院临床兽医学实验室提供;硫化氢、葡萄糖蛋白陈水、蛋白脉水、庶糖、尿素、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、拧檬酸盐、棉子糖、山梨醇和甘露醇12种细菌微量生化反应管，购自杭州天河微生物试剂有限公司。
1.1.2仪器设备
HG1Ol-2型电热鼓风干燥箱，南京实验仪厂;HH？B11型电热恒温培养箱，厦门建红医疗器械厂;OLYMPWS-CH型显微镜。
1.1.3病料来源
由河南科技学院兽医院提供的初步确诊为大肠杆菌病病鸡4家病料。主要表现为急性败血症型、心包炎、输卵管腹膜炎、肝周炎、肠炎和气囊炎6等种病型。
1.1.4实验动物
健康小白鼠20只，体重20-25g，由河南科技学院临床兽医学实验室提供。
1.2方法
1.2.l分离培养
无菌采取濒死鸡和死亡24h以内具有败血症、心包炎、肝周炎等病理变化的鸡心脏、肝脏、脾脏，直接划线接种于麦康凯培养基，37'C培养24h，观察菌落生长情况。在麦康凯培养基上挑取宜径I-3mm桃红、粉红色的露
珠状菌落，分别划线接种于普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、普通营养肉汤培养基中，37'C培养24h，进行观察;挑取典型菌落接种于普通琼脂斜面，37'C培养24h，以备生化试验;同时进行革兰氏染色镜检观察菌体形态。
1.1.2形态观察
挑取麦康凯培养基上生长的红色菌落、伊红美蓝平板上的暗黑色带金属光泽的菌落，涂片进行革兰氏染色，光学显微镜镜检观察菌体形态。
1.2.3生化试验
将分离纯化的细菌在无菌条件下进行糖发酵试验、甲基红试验、V-P试验、P5I噪试验、硫化氢试验、尿素酶试验、袧檄酸盐利用试验检测。
1.2.4致病性试验
菌液制备：将分离荫接种于营养肉汤，于温度37培养20h，结果呈均匀混浊，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌环。
动物试验：20只小白鼠分成2组，每组10只。A组为试验组，用鸡大肠杆菌肉汤培养物接种，腹腔注射0.2ml/只;B组为对照组，腹腔注射灭菌生理盐水0.2ml/只。注射后每隔-段时间观察1次，连续观察7天。剖检病、死鼠，取死鼠的肝脏进行涂片染色镜检，冉将其接种于麦康凯琼脂，挑取可疑菌落进行分离培养，进行观察。
1.2.5药敏试验药敏
贴上纸片后置于37'C培养24h后观察结果并测盘抑菌圈大小。
判定标准：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感;抑菌圈直径在10～15mm之间为中度敏感;抑菌圈直径小于10mm为耐药l气，
2结果与分析
2.1分离培养结果
分离菌在麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为I.5-2.5mm的小菌落;在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落;在普通琼脂斜面上为灰白色菌落;在普通肉汤中呈均匀浑浊，管底有灰白色沉淀，振荡呈云雾状散开，并有粪臭味。
2.1形态学观察结果
革兰氏染色镜检，可见到革兰氏阴性，两端钝圆，长约1.0-3.0mm的短小杆菌，多单在，偶有2个菌体相连，无芽孢。
2.2致病性试验结果
A组4只小鼠6h内死亡，6只24h内死亡。病理剖检可见肝脏肿大，有出血点坏死点;肠严重鼓气，心包淤血，肺出血，脾脏淤血。采取死亡小鼠心血、肝和脾接种在普通琼脂平板及普通肉汤，37'C培养20h，有细菌生长。革兰氏染色及生化鉴定表明此菌与接种细菌为同种细菌。说明该菌对小鼠具有较强的致病力。B组饲养7d后全部存活，剖检未见病变。
2.3药敏试验结果
分离的菌株对沙拉磋吹全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头玸磋吹和卡那霉素、庆大霉素部分敏感，其他抗菌药物完全没有抑制效果。
3讨论
试验的病料均是从具有心包炎、肝周炎、气囊炎等病理特征的病死鸡身上采集，进行病原菌的分离培养、生化鉴定、动物试验和药敏试验，共分离到4株致病性大肠杆菌，均对沙拉噢吐敏感。药敏试验结果显示分离菌对沙拉噢吹全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头抱磋吹和卡那霉素、庆大霉素部分敏感，对其他抗菌药物均不敏感。说明当前鸡大肠杆菌的耐药谱较广。不过本次试验由于时间紧，菌株少所得結果有-定的片面性。
引发本病的主要原因是温度过高过低或温差过大;其次是由于鸡场长期大昼使用抗生素，不但破坏了肠道正常的菌群关系，而且使致病性大肠杆菌对多种抗菌药产生耐药性;另外，大型栠约化养殖场饲养密度过大，通风换气不良，饲管用具及环境消毒不彻底是加速本病流行的因。素对于本病的防治应注重预防，加强饲养管理，改善饲喂环境，同时注意免疫，用药注意产生耐药性和药物残留的现象正“。
参考文献
[1]胡桂学.兽医微生物实验教程[M].北京：中国衣业大学出版杜，2006：35-38.
[2]孟志敏，李连缺，米同国，等成鸡大肠杆菌病流行情况的调查[J].中国家禽，1999（4）：14.