【摘 要】
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目的 构建hTERT启动子调控的表达β-actin、GAPDH基因小干扰RNA(siRNA)的条件增殖腺病毒.方法分别将β-actin-siRNA、GAPDH-siRNA的模板DNA克隆至质粒pGPH1/GFP/Neo,构建pGPHI/GFP/Neo-β-actin、pGPH1/GFP/Neo-GAPDH.以pGPH1/GFP/Neo-β-actin为模板,PCR扩增出β-actin-siRNA表
【机 构】
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221002,江苏,徐州医学院附属医院泌尿外科,221002,江苏,徐州医学院附属医院泌尿外科,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,221002,江苏,徐州医学院附属医
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目的 构建hTERT启动子调控的表达β-actin、GAPDH基因小干扰RNA(siRNA)的条件增殖腺病毒.方法分别将β-actin-siRNA、GAPDH-siRNA的模板DNA克隆至质粒pGPH1/GFP/Neo,构建pGPHI/GFP/Neo-β-actin、pGPH1/GFP/Neo-GAPDH.以pGPH1/GFP/Neo-β-actin为模板,PCR扩增出β-actin-siRNA表达框并克隆进质粒pZHTERT,获得pZHTERT-β-actin;以pGPH1/GFP/Neo-GAPDH为模板,扩增出GAPDH表达框并克隆进质粒pZD55,获得pZD55-GAPDH.将pZHTERT-β-actin、pZD55-GAPDH重组,构建穿梭质粒pTD-GAPDH-β-actin,并与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12 d后出现病毒空斑,提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为双调控增殖腺病毒TD-GAPDH-β-actin.扩增、纯化、测病毒滴度.结果 成功构建hTERT启动子调控的表达GAPDH、β-actin小干扰RNA的条件增殖腺病毒.病毒滴度为2×1011PFU/ml.结论成功构建了TD-GAPDH-β-actin,为研究双基因小干扰RNA靶向治疗肿瘤奠定了基础。
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目的 观察丁酸钠对膀胱癌细胞生长的影响.方法 不同浓度的丁酸钠干预后,采用~3H-TdR掺入试验比较了膀胱癌BIU-87和E-J细胞的生长曲线变化,并采用流式细胞术研究了丁酸钠对膀胱癌细胞周期的影响.结果 1 mmol/L浓度组在各观察时间点均未显示出对E-J细胞的抑制;5、10mmol/L在各观察点显示出明显的生长抑制作用,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);随着丁酸钠浓度的升高,越来越多
本研究旨在分析传统的妇产科腹部切口皮内缝合法与下腹部手术直切口皮下脂肪不缝合的皮内缝合法两种的利弊,现将结果报道如下. 一、资料与方法1.一般资料:从2007年1月至2009年4月在我院妇产科住院拟作开腹手术的302例患者随机分为2组,采用不同的缝合方法关腹:一组为研究组,共150例,常规缝合腹膜和前鞘后,应用4-0可吸收缝合线连续褥式缝合皮内,而不缝合脂肪层;另一组为对照组,共152例,采用传
目的 比较两种去神经支配压力性尿失禁(SUI)模型的效果.方法 30只雌性Wistar大鼠随机分为3组.测漏尿点压力(LPP),3组分别切断坐骨神经、阴部神经和只游离不切断,术后2周测LPP,行喷嚏试验.术后1月行尿道组织学检查.解剖坐骨、阴部神经.结果 3组术前LPP差异无统计学意义(P>0.05).对照组手术前后LPP分别为(27.567 70±5.434 89)、(30.132 20±5.7
目的 探讨CT引导下臭氧消融术联合神经根阻滞治疗腰椎间盘突出症的穿刺的准确性、治疗的安全性以及疗效.方法 选择200例腰椎问盘突出症患者,随机分为2组:A组100例,单纯行臭氧消融术,B组:100例,臭氧消融术联合神经阻滞治疗,治疗前1d、治疗后3d、3、6个月测定疼痛视觉模拟评分(VAS),治疗总有效率来评估治疗效果(比较常用的是MacNab法评价疗效).结果 两组患者治疗后3d、3、6个月VA
经皮肾穿刺造瘘术是一种安全有效的微创技术[1].我们以血清胱抑素C(Cys C)观察大鼠肾穿刺造瘘模型中不同孔径、不同灌注压力对肾脏造成的损伤。
瘦素(leptin)可参与组织的创伤修复.当皮肤创伤范围较大、坏死组织较多时,其修复必须通过肉芽组织形成来实现.而目前尚未见瘦素对整体动物创伤肉芽组织细胞增殖和基质生成影响的报道.本研究旨在从细胞增殖和胶原等蛋白合成角度观察瘦素对皮肤创伤大鼠肉芽组织生成的影响,为探讨瘦素促进皮肤创伤愈合作用的机制提供实验依据。
目的 观察胶原凝胶三维培养对肾上腺细胞形态和功能的影响.方法分离SD大鼠乳鼠肾上腺细胞,于自制鼠尾型Ⅰ胶原凝胶中培养14 d,与传统平面培养的肾上腺细胞相对比,比较两者在细胞形态、细胞增殖率、蛋白表达和分泌功能方面的差异.结果两种培养方式下,肾上腺细胞均能表达其特异性细胞色素氧化酶CYP11B1和CYP11B2.原代培养8 d后,三维胶原凝胶培养大鼠肾上腺细胞的增殖率显著高于平面培养,至第14天,
目的 观察重组人血管内皮抑制素（YH-16）对不同放疗处理的lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子（HIF）-1α和血管内皮生长因子（VEGF）的影响.方法 将60只lewis肺癌细胞小鼠随机分为5组：空白对照组、大剂量单次放疗组、小剂量分次放疗组、大剂量单次放疗联合YH-16组、小剂量分次放疗联合YH-16组.作相应处理后绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,用免疫组织化学测定各组HIF-1α和VEGF的阳性表
目的 观察常温肝素液对猪自体肺叶移植术后肺组织超微结构及气体交换能力变化的影响.方法 将杂种猪18只随机分为对照组、肝素组及Euro-Collins(EC)液组.各组均在全肺切除后立即行自体肺叶移植(左侧全肺切除+左肺下叶白体肺叶移植),对照组予常温生理盐水,肝素组予常温肝素液灌注供肺,EC液组予4℃ EC液灌注.移植前、移植后0.5、1、2、4h检测移植肺的肺静脉血氧分压(PvO2)、二氧化碳分
目的 观察大鼠肝缺血再灌注小肠过氧化损伤及丹参预处理的保护作用.方法 首先将SD大鼠随机分为正常对照组(CO组)、假手术组(SO组)、缺血再灌注组(IR组)、丹参预处理组(SM组),分别在肝缺血30、45、60 min时取上段空肠进行大体病理学检测;然后在肝缺血45 min条件下,动物亦随机分为4组(CO组、SO组、IR组、SM组),按再灌注后不同时间(0、3、12、24、72 h)分为5个亚组,