【摘 要】
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马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus, TelMV）、东亚西番莲病毒（East Asian passiflora virus, EAPV）和西番莲重型斑驳相关病毒（Passion fruit severe mottle-associated virus,PFSMaV）严重危害我国西番莲（Passiflora edulis）产业。迄今植物病毒
【机 构】
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浙江大学生物技术研究所/水稻生物学国家重点实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2019YFD1001800）； 国家自然科学基金（31772125）；
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马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus, TelMV）、东亚西番莲病毒（East Asian passiflora virus, EAPV）和西番莲重型斑驳相关病毒（Passion fruit severe mottle-associated virus,PFSMaV）严重危害我国西番莲（Passiflora edulis）产业。迄今植物病毒没有有效的防治药剂，而病毒检测技术是植物病毒防控手段建立的关键。本研究利用田间采集的TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒复合侵染的西番莲，从病叶提纯病毒粒子，以混合病毒粒子作为BALB/c小鼠（Mus musculus）的免疫原，通过杂交瘤技术获得能特异、广谱检测这3种病毒的单克隆抗体。Western blot检测发现，研制的4株单克隆抗体能同时识别TelMV、EAPV和PFSMaV的衣壳蛋白。进一步以制备的病毒单抗为检测抗体，建立用于快速检测这3种病毒的血清学检测方法，即斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）和组织印迹酶联免疫吸附试验（Tissue print-ELISA）。特异性和广谱性测定结果表明，建立的2种血清学方法均能简单快速、特异灵敏、广谱高效地检测西番莲中的TelMV、EAPV和PFSMaV，而检测感染同属的李痘病毒（Plumpox virus,PPV）、马铃薯Y病毒（Potato Virus Y, PVY）、马铃薯A病毒（Potato Virus A, PVA）和芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）病叶、感染黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）和西番莲潜隐病毒（Passiflora latent virus, PLV）的病叶及健康西番莲叶片均呈阴性反应。灵敏度测定结果表明，Dot-ELISA方法检测病叶粗提液的灵敏度高达1∶20 480（W/V, g/mL）倍稀释，即绝对检出量为0.097 6 ng感病植物组织。田间样品的检测结果表明，建立的2种血清学方法能准确、广谱、灵敏地用于检测侵染西番莲的3种马铃薯Y病毒属病毒，其结果与RT-PCR的符合率达到100%。本研究为TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒的检测诊断、无毒种子种苗生产及其科学防控提供技术支持。
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