目的 探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响.方法 针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞后用RT-PCR方法鉴定沉默效果.采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT-PCR,观察抑制IER3IP1基因表达后对K562细胞的影响;采用0.2μmoL/L伊屿替尼诱导K562细胞2 d,观察诱导分化过程中IER3IP1基因表达变化情况.抑制IER3IP1基因表达后对红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin以及细胞表面GPA蛋白表达的影响.结果 成功构建针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体,转染至K562细胞中,该基因mRNA表达水平明显降低,抑制率达76%(P<0.01).与对照组细胞相比,K562-shRNA-IER3IP1组bcr-abl mRNA表达升高(P<0.05);MTT检测结果显示细胞增殖能力增强(P<0.01);流式细胞术检测结果显示S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少(P<0.05);电镜可见细胞常染色质增加、异染色质减少,内质网部分扩张,囊泡样结构滞留.0.2μmol/L伊马替尼作用48 h后,K562-shRNA-IER3IP1组联苯胺染色阳性率由作用前的(44.7±2.5)%降低至(22.7±1.5)%(P<0.01),且红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin的mRNA表达水平明显降低,细胞表面GPA蛋白表达水平降低.同时伊马替尼作用过程中IER3IP1基因在作用3 h时表达明显升高,6 h时降低,12~48 h表达水平基本不变.结论 干扰IER3IP1基因表达后,K562细胞增殖加快,红系分化过程受阻,提示该基因可能在K562细胞增殖和向红系分化过程中发挥作用。
shRNA干扰IER3IP1基因表达对K562细胞增殖和红系分化的影响
【摘 要】
:
目的 探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响.方法 针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞后用RT-PCR方法鉴定沉默效果.采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT-PCR,观察抑制IER3IP1基因表达后对K562细胞的影响;采用0.2μmoL/L伊屿替尼诱导K562细胞2 d,观察诱导分化过程中IER
【机 构】
:
400016,重庆医科大学临床生化教研室,临床检验诊断学教育部重点实验室,400016,重庆医科大学临床生化教研室,临床检验诊断学教育部重点实验室,400016,重庆医科大学临床生化教研室,临床检验诊
【出 处】
:
中华血液学杂志
【发表日期】
:
2009年30期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 通过基因合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子(CM-HBX),再以慢病毒感染的方式构建稳定表达核心启动子的L-02细胞株,建立肝癌发生的细胞模型.方法 通过基因合成的方法,合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子,在N末端加上标记序列HBX-Flag,分别双酶切pLenO-RTP载体和pUC57-CM-HBX
目的 通过检测NB4细胞活化JAK1蛋白水平探讨三氧化二砷(As2O3)对其增殖抑制的分子生物学机制.方法 利用Western blot检测NB4细胞JAK1蛋白表达及磷酸化水平;用小分子RNA(siRNA)干扰NB4细胞JAK1蛋白的表达及转染JAK1质粒使NB4细胞内JAK1过表达;应用MTF法及锥虫蓝拒染法观察在JAK1基因沉默或过表达的状态下,As2O3抑制NB4细胞增殖的变化情况;在此基
企事业单位中一项重要的投资支出就是建设项目的支出,将投资项目的跟踪审计工作全面做好是各单位内部审计部门的重要职责之一.本文主要分析建设项目中跟踪审计全过程中造价控
改革开放以来,我国经济蓬勃发展,网络在企事业单位迅速蔓延,计算机网络扮演的角色愈来愈重要,信息化管理在各行各业以及人们的日常生活中日益普及,涉及IT所处理的问题亦变得
随着我国经济的发展,各种制造品不断涌现,制造行业蓬勃发展,其中运用到各类模具,而一般来说橡胶制品中模具清洗是一重要环节.就此本文对橡胶硫化模具的清洗方法进行简单的分
测量了在FR4基板上用引线键合和顶充胶封装的湿度传感器在无防护、氮化硅薄膜防护、硅酮涂层防护、硅酮涂层加氮化硅薄膜防护四种情况下及在不同温湿度环境下的水汽扩散曲线
目的 探讨肝脏缺血再灌注时活化转录因子-6α(ATF-6α)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)的差异表达、丹参预处理对其表达的影响及意义.方法 80只Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血再灌注组(C组)和丹参预处理组(D组).采用无损伤动脉钳钳夹肝蒂,建立肝缺血45 min再灌注0、3、12、24、72 h模型.采用Western blot和免疫组
硬度,是表示水中含有的钙、镁等离子含量多少的一个指标,这些离子都能和肥皂发生反应,生成沉淀.水中的硬度主要是由于地表水从流经的岩石,土壤中溶解出的多价金属离子导致的,
介绍了内蒙古自治区河套灌区乌拉特前旗红卫节水试验示范园排水系统建后观测的情况 ,分析表明 ,示范园排水系统对于控制地下水位 ,改良盐碱地 ,建设高产稳产农田起了重要的作