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摘 要：为了解反相高效液相色谱法在食品中防腐剂和甜味剂测定中的应用情况，本文采用C18色谱柱，建立了反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂的方法体系。检测器在210 nm波长、230 nm波长位置分别检测出糖精钠与阿斯巴甜、山梨酸与安赛蜜，脱氢乙酸色谱峰出现在293 nm检测波长条件下。结果表明，在利用反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂时，各组分质量浓度处于1.0～100.0 μg/mL可达到最佳线性关系，且精密度与准确度较高。
关键词：反相高效液相色谱法;食品;防腐剂;甜味剂
食品中防腐剂和甜味剂的存在，对食品品质、口味有直接的影响，也是食品安全管理至关重要的内容。测定食品中防腐剂和甜味剂的含量及类型，是食品安全管理的依据。反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂，该方法具有准确性好、样品前处理简单、精密度高的优良特点。根据食品中防腐剂和甜味剂的测定要求，探究反相高效液相色谱法的应用非常必要。
1 材料与方法
1.1 试剂与设备
在测定前，准备食品添加剂标准品，主要为糖精钠、阿斯巴甜、山梨酸、安赛蜜等。同时准备92 g/L亚铁氰化钾溶液、183 g/L乙酸锌溶液、0.02 mol/L的乙酸铵溶液[1]。
日本岛津带He脱气装置的高效液相色谱仪;国产电动离心沉淀剂;带二极管阵列的检测器;感量为0.001 g的电子分析天平;转速大于8 000 r/min的离心机;涡旋振荡器;超声波清洗仪[2]。
1.2 实验方法
1.2.1 测定条件
流动相溶剂A为0.02 mol乙酸铵溶液，由超声后二水乙酸220 g与500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制;流动相溶剂B为甲醇，色谱纯[3]。梯度洗脱程序为：5.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min;设定初始浓度为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，糖精钠、脱氢乙酸出峰时间相同，色谱峰单独积分计算难度大，可以调整为10%溶剂B+90%溶剂A，流速为0.8～1.0 mL/min，洗脱时间为5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶剂B和95.0%溶剂B洗脱时，出峰时间延后，影响了分析效率，在20.0 min后，可以调整流动相比例为38%溶剂B+62%溶剂A，流动速度为1.0 mL/min，洗脱时间为20～40 min。山梨酸在洗脱比例为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，且流动速度为1.0 mL/min时，与样品中其他干扰杂峰分离，可以在洗脱时调整洗脱时间范围为40～48 min。
设定在230 nm波长下进行安赛蜜、山梨酸测定，在210nm波长下进行阿斯巴甜、糖精钠测定，在293 nm波长下进行脱氢乙酸测定。同时设定检测器柱温为37.0～39.0 ℃，进样量为10 μL，灵敏度为0.08 aufs[4]。
1.2.2 样品处理
对于酱油等液体样品，直接取样并加水稀释20倍，以50%氨水调节酸碱值至中性偏弱碱性。调节酸碱值后进行超速离心，取上清液备用。
含二氧化碳、酒精的软饮料，需要取10.00 g加热后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管内用水定容并经滤膜过滤，滤膜孔径为0.45 μm。
对于酱菜、果脯等固体样品，切碎后混合均匀加入8.0 mL水，超声30 min时后用水定容到10.0 mL，定容后经0.45 μm滤膜过滤处理。饼干等基质成分复杂的样品，需要在利用石油醚脱脂处理的基础上，粉碎并均匀混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸锌溶液和20.0 g/L氢氧化钠溶液，超声0.5 h后，用水定容到25.0 mL经0.45 μm滤膜过滤待测定[5]。
酸奶等固液混合样，需将其混合均匀后加入100 g/L硫酸铵溶液以及等量的两份水，超声30 min后，用水定容到10.0 mL经0.45 μm滤膜过滤处理备用。
2 结果与分析
2.1 定量测定结果
依据前述测定条件，对前期处理完毕的样品进行测定，得出结果为：可乐含安赛蜜12.5 mg/kg;酸奶中糖精钠含量为155.2 mg/kg，山梨酸含量为112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量为936.5 mg/kg、安赛蜜含量为35.1 mg/kg;饼干含阿斯巴甜61.3 mg/kg;酱菜含安赛蜜32.6 mg/kg;果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安赛蜜含量为469.5 mg/kg;酱油含脱氢乙酸123.5 mg/kg。重复测定6次后，得出测定结果的相对标准偏差在3.5%～8.5%，准确度较高。
2.2 线性范围与相关系数
对反相高效液相色谱法进行方法学考察验证，其中山梨酸标准线性范围在2.0～20.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 85，糖精钠标准线性范围为0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 98，脱氢乙酸在1.0～100.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 97，阿斯巴甜的标准线性范围在0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 78;安赛蜜的标准线性范围在2.0～50.0 μg/mL，相关系数为0.999 45。
2.3 加標回收率
利用电子天平称取5.0 g酱菜、果脯、酸奶、饼干（油炸）、可乐、酱油各6分，添加糖精钠、脱氢乙酸、山梨酸、安赛蜜、阿斯巴甜标准物，添加量分别为50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及对应的添加量、变异系数如表1所示。利用该方法对食品中山梨酸、脱氢乙酸等防腐剂以及糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜等甜味剂进行检测，可以获得准确性较好的结果，满足大批量食品防腐剂、甜味剂检测要求。
3 结论
反相高效液相色谱法是一种准确度高、分离度佳、精密度好和耗时短的定量分析方法，可以满足食品中多种防腐剂和甜味剂的测定要求。在食品中防腐剂与甜味剂测定中，相关人员可以选择反相高效液相色谱法，配合C18柱梯度洗脱，在200～293 nm波长范围内进行检测，可压缩样品检测时间，提高样品检测效率。
参考文献
[1]柏中波，王晶，张国莹.反相高效液相色谱法联合测定食品中多种防腐剂、甜味剂及富马酸二甲酯[J].食品安全导刊，2018（24）：122-123.
[2]尹霞，陈斌，王燕清，等.反相高效液相色谱法测定阿立哌唑中的有关物质[J].中南药学，2021（6）：1189-1194.
[3]覃芳，李广胜，郭兴辉，等.反相高效液相色谱法同时测定利肝宁片中对羟基苯乙酮和绿原酸的含量[J].中医学报，2021（4）：833-837.
[4]刘东平，谢海燕.RP-HPLC法测定血浆中奥卡西平及其活性代谢物浓度[J].广东化工，2021（10）：231-233.
[5]冯光军，罗丹，冉凤英，等.反相高效液相色谱法测定参芪降糖胶囊中梓醇含量[J].中国药业，2021（9）：63-65.
关键词：反相高效液相色谱法;食品;防腐剂;甜味剂
食品中防腐剂和甜味剂的存在，对食品品质、口味有直接的影响，也是食品安全管理至关重要的内容。测定食品中防腐剂和甜味剂的含量及类型，是食品安全管理的依据。反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂，该方法具有准确性好、样品前处理简单、精密度高的优良特点。根据食品中防腐剂和甜味剂的测定要求，探究反相高效液相色谱法的应用非常必要。
1 材料与方法
1.1 试剂与设备
在测定前，准备食品添加剂标准品，主要为糖精钠、阿斯巴甜、山梨酸、安赛蜜等。同时准备92 g/L亚铁氰化钾溶液、183 g/L乙酸锌溶液、0.02 mol/L的乙酸铵溶液[1]。
日本岛津带He脱气装置的高效液相色谱仪;国产电动离心沉淀剂;带二极管阵列的检测器;感量为0.001 g的电子分析天平;转速大于8 000 r/min的离心机;涡旋振荡器;超声波清洗仪[2]。
1.2 实验方法
1.2.1 测定条件
流动相溶剂A为0.02 mol乙酸铵溶液，由超声后二水乙酸220 g与500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制;流动相溶剂B为甲醇，色谱纯[3]。梯度洗脱程序为：5.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min;设定初始浓度为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，糖精钠、脱氢乙酸出峰时间相同，色谱峰单独积分计算难度大，可以调整为10%溶剂B+90%溶剂A，流速为0.8～1.0 mL/min，洗脱时间为5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶剂B和95.0%溶剂B洗脱时，出峰时间延后，影响了分析效率，在20.0 min后，可以调整流动相比例为38%溶剂B+62%溶剂A，流动速度为1.0 mL/min，洗脱时间为20～40 min。山梨酸在洗脱比例为5.0%溶剂B和95.0%溶剂B，且流动速度为1.0 mL/min时，与样品中其他干扰杂峰分离，可以在洗脱时调整洗脱时间范围为40～48 min。
设定在230 nm波长下进行安赛蜜、山梨酸测定，在210nm波长下进行阿斯巴甜、糖精钠测定，在293 nm波长下进行脱氢乙酸测定。同时设定检测器柱温为37.0～39.0 ℃，进样量为10 μL，灵敏度为0.08 aufs[4]。
1.2.2 样品处理
对于酱油等液体样品，直接取样并加水稀释20倍，以50%氨水调节酸碱值至中性偏弱碱性。调节酸碱值后进行超速离心，取上清液备用。
含二氧化碳、酒精的软饮料，需要取10.00 g加热后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管内用水定容并经滤膜过滤，滤膜孔径为0.45 μm。
对于酱菜、果脯等固体样品，切碎后混合均匀加入8.0 mL水，超声30 min时后用水定容到10.0 mL，定容后经0.45 μm滤膜过滤处理。饼干等基质成分复杂的样品，需要在利用石油醚脱脂处理的基础上，粉碎并均匀混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸锌溶液和20.0 g/L氢氧化钠溶液，超声0.5 h后，用水定容到25.0 mL经0.45 μm滤膜过滤待测定[5]。
酸奶等固液混合样，需将其混合均匀后加入100 g/L硫酸铵溶液以及等量的两份水，超声30 min后，用水定容到10.0 mL经0.45 μm滤膜过滤处理备用。
2 结果与分析
2.1 定量测定结果
依据前述测定条件，对前期处理完毕的样品进行测定，得出结果为：可乐含安赛蜜12.5 mg/kg;酸奶中糖精钠含量为155.2 mg/kg，山梨酸含量为112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量为936.5 mg/kg、安赛蜜含量为35.1 mg/kg;饼干含阿斯巴甜61.3 mg/kg;酱菜含安赛蜜32.6 mg/kg;果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安赛蜜含量为469.5 mg/kg;酱油含脱氢乙酸123.5 mg/kg。重复测定6次后，得出测定结果的相对标准偏差在3.5%～8.5%，准确度较高。
2.2 线性范围与相关系数
对反相高效液相色谱法进行方法学考察验证，其中山梨酸标准线性范围在2.0～20.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 85，糖精钠标准线性范围为0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 98，脱氢乙酸在1.0～100.0 μg/mL时达到最佳线性关系，相关系数为0.999 97，阿斯巴甜的标准线性范围在0.0～100.0 μg/mL，相关系数为0.999 78;安赛蜜的标准线性范围在2.0～50.0 μg/mL，相关系数为0.999 45。
2.3 加標回收率
利用电子天平称取5.0 g酱菜、果脯、酸奶、饼干（油炸）、可乐、酱油各6分，添加糖精钠、脱氢乙酸、山梨酸、安赛蜜、阿斯巴甜标准物，添加量分别为50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及对应的添加量、变异系数如表1所示。利用该方法对食品中山梨酸、脱氢乙酸等防腐剂以及糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜等甜味剂进行检测，可以获得准确性较好的结果，满足大批量食品防腐剂、甜味剂检测要求。
3 结论
反相高效液相色谱法是一种准确度高、分离度佳、精密度好和耗时短的定量分析方法，可以满足食品中多种防腐剂和甜味剂的测定要求。在食品中防腐剂与甜味剂测定中，相关人员可以选择反相高效液相色谱法，配合C18柱梯度洗脱，在200～293 nm波长范围内进行检测，可压缩样品检测时间，提高样品检测效率。
参考文献
[1]柏中波，王晶，张国莹.反相高效液相色谱法联合测定食品中多种防腐剂、甜味剂及富马酸二甲酯[J].食品安全导刊，2018（24）：122-123.
[2]尹霞，陈斌，王燕清，等.反相高效液相色谱法测定阿立哌唑中的有关物质[J].中南药学，2021（6）：1189-1194.
[3]覃芳，李广胜，郭兴辉，等.反相高效液相色谱法同时测定利肝宁片中对羟基苯乙酮和绿原酸的含量[J].中医学报，2021（4）：833-837.
[4]刘东平，谢海燕.RP-HPLC法测定血浆中奥卡西平及其活性代谢物浓度[J].广东化工，2021（10）：231-233.
[5]冯光军，罗丹，冉凤英，等.反相高效液相色谱法测定参芪降糖胶囊中梓醇含量[J].中国药业，2021（9）：63-65.