海马神经元原代培养方法

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目的:掌握海马神经元的有效培养方法和细胞保存培养方法,利于细胞模型的建立。方法:取出出生1 d的SD大鼠海马,联合机械吹打法和胰酶消化法分离海马细胞,加入DMEM/F12+10%FBS制备细胞悬液,接种在玻璃培养瓶内1~2 d,收集上清细胞液、离心、重悬细胞;再接种在培养板上,培养1 d后,全液更换为Neurobasal+2%B27,以后每3 d半量换液。利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;利用NF-200、Neu-N抗体免疫荧光、免疫组化技术鉴定海马神经元;利用96孔板培养细胞,计数每个孔海马细胞比例;
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