不同钙离子浓度体外条件下磷酸化对肌联蛋白降解的影响

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本实验主要研究不同钙离子浓度体外条件下磷酸化对肌联蛋白降解的影响。以羊背最长肌中肌联蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶体外孵育使肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。反应后添加μ-钙蛋白酶,在钙离子浓度分别是0.05 mM和2 mM条件下,4℃孵育2 d。测定孵育体系pH、肌联蛋白磷酸化水平及其降解程度。结果表明不同处理组孵育体系pH差异不显著(P>0.05)。蛋白激酶A组肌联蛋白磷酸化水平显著高于对照组,对照组肌联蛋白磷酸化水平显著高于碱性磷酸酶组(P<0.05)。当Ca2+浓度为0.05 mM时,蛋白激酶A组和对照组未检测到分子量为1200 kDa的降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育12 h检测到该条带。当Ca2+浓度为2 mM时,蛋白激酶A组和对照组均在孵育12 h检测到1200 kDa降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育0.5h时检测到该条带。结论:蛋白激酶A和碱性磷酸酶能够促进肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。随着钙离子浓度增加,肌联蛋白降解速率加快。并且在相同钙离子浓度下,肌联蛋白在碱性磷酸酶组降解较快,表明去磷酸化可以促进肌联蛋白的降解。
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