【摘 要】
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以薏苡黑穗病菌粉胞内蛋白为免疫原,制备抗体,建立薏苡黑穗病ELISA检测方法。结果表明,测定纯化后抗体的最高效价为1∶800000,具特异性强;方阵试验测定抗原的最佳包被浓度为1
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31760423),贵州省科技厅、贵州省农业科学院联合项目(黔科合LJH字〔2014〕7709,黔科合LJH字〔2014〕7683),贵州省第五批人才基地项目(黔人领发〔2016〕22号),贵州省农业科学院院专项(黔农科院院专项〔2016〕019号),贵州农业科技支撑项目(黔科合支撑〔2017〕2508)
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以薏苡黑穗病菌粉胞内蛋白为免疫原,制备抗体,建立薏苡黑穗病ELISA检测方法。结果表明,测定纯化后抗体的最高效价为1∶800000,具特异性强;方阵试验测定抗原的最佳包被浓度为103 CFU/mL,抗体的工作浓度为1∶4000;优化ELISA检测条件,确定抗体4℃过夜(8~12 h)包被效果最好,选择1%酪蛋白作为抗体的封闭液,抗体的最佳封闭时间为1.5 h,抗体的最佳孵育时间为2.5 h,最佳底物作用时间为15 min;建立ELISA标准工作曲线,表明抗体的灵敏度为104 CFU/mL。ELISA检测田
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