短发卡RNA稳定沉默FOXM1对肝癌细胞体外生长的影响

来源 :中华普通外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangweichao
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目的 探讨短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体稳定沉默叉头框M1(forkhead box M1,FOXM1)基因对人肝癌细胞体外生长的影响.方法 构建针对人类FOXM1mRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体,选择干扰效果最佳的表达载体和阴性对照质粒转染人肝癌细胞QGY-7703,用新霉素(G418)筛选稳定转染的克隆.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和平板克隆形成实验检测FOXM1基因沉默前后肝癌细胞体外生长能力的变化.用Annexin V-APC/PI双染法检测细胞凋亡.结果 不同人肝癌细胞株中普遍表达FOXM1蛋白.4个shRNA表达载体中,shRNA-1026表达载体的干扰效果最佳,对FOXM1 mRNA和蛋白表达水平的抑制率分别为38.5%和53.2%.用shRNA-1026稳定沉默FOXM1基因后,QGY-7703细胞增殖受到抑制,培养48、72和96 h后,沉默组的吸光值均显著低于对照组(分别t=10.830,3.578,5.734,均P<0.05);沉默组的克隆形成能力较对照组显著降低(t=5.336,P<0.05),而细胞凋亡较对照组显著增加(t=6.827.P<0.05).结论 shRNA表达载体稳定沉默FOXM1基因抑制肝癌细胞的生长.
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