【摘 要】
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在软件模拟分析的基础上,运用半理性设计转换传统去除N-糖基化的方式,同时在反向转角区引入具有增强芳香族序列(enhanced aromatic sequence EAS)特征的新N-糖基化,提高了碱
【机 构】
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安徽工程大学生物与化学工程院,江南大学、工业生物技术教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(31671797);安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(KJ2016A801、KJ2017A123);国家级大学生创新创业训练计划项目(2016103630062);安徽工程大学中青年拔尖人才项目(2016BJRRC006)
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在软件模拟分析的基础上,运用半理性设计转换传统去除N-糖基化的方式,同时在反向转角区引入具有增强芳香族序列(enhanced aromatic sequence EAS)特征的新N-糖基化,提高了碱性果胶酶(alkaline polygalacturonate lyase PGL)的热稳定性,获得了高品质的PGL工程菌。将355位点的苏氨酸突变成突变能低的色氨酸来去除353位点的N-糖基化使酶的半衰期提高了176%,但与目标值仍相距甚远;再将127和137位点同时引入新N-糖基化使酶的半衰期达到1.35h,与目标值接近。在酶的反向转角区引入具有EAS特征的新N-糖基化对提高酶的热稳定性具有显著促进作用。
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