【摘 要】
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目的:探讨TDP-25对SH-SY5Y细胞自噬蛋白表达及细胞活力、凋亡的影响。方法:将神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为3组,分别转染质粒GFP-N1、GFP-TDP-43和GFP-TDP-25,24 h后应用免疫
【机 构】
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郑州大学第一附属医院神经内科,河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室
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目的:探讨TDP-25对SH-SY5Y细胞自噬蛋白表达及细胞活力、凋亡的影响。方法:将神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为3组,分别转染质粒GFP-N1、GFP-TDP-43和GFP-TDP-25,24 h后应用免疫荧光法检测包涵体,Western blot法检测LC3、Beclin-1蛋白的表达情况。将SH-SY5Y细胞转染质粒GFP-TDP-25后分为2组,一组加自噬抑制剂3-MA,一组不加3-MA,MTT比色法检测细胞活力,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:GFP-N1组细胞胞质、胞核均见较强绿色荧光信号;GFP-TDP-43组较强的绿色荧光信号分布于胞核中,未见明显的包涵体形成;GFP-TDP-25组可见较强的绿色荧光信号颗粒状分布于胞质中,形成包涵体;3组Beclin-1表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ差异有统计学意义(F=192.700、247.420,P<0.05),GFP-TDP-25组Beclin-1表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ大于GFP-TDP-43组(P<0.05),后者大于GFP-N1组(P<0.05)。加入3-MA后,转染GFP-TDP-25的细胞细胞活力降低,细胞凋亡率增高(t=38.595、5.920,P<0.001)。结论:TDP-25可能通过上调细胞巨自噬水平减弱其对细胞的损害。调控巨自噬水平对肌萎缩性侧索硬化症和额颞叶变性患者的病情进展可能起到一定的延缓作用。
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