【摘 要】
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目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的套式一实时荧光定量PCR法.方法 根据HBV cccDNA与松环DNA(rcDNA)结构上的差异,设计2对跨缺口的特异引物及1条位于负链缺口下游的特异TaqMan荧光探针.根据Plasmid-SafeTM ATP-Dependent Dnasc(PSAD)对rcDNA与cccDNA作用的不同,对模板DNA进行酶切纯化,降解reDNA,再进行套
【机 构】
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延安大学附属医院感染病科,716000,710038,西安,第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,710038,西安,第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,710038,西安,第四军医大学唐都医院
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目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的套式一实时荧光定量PCR法.方法 根据HBV cccDNA与松环DNA(rcDNA)结构上的差异,设计2对跨缺口的特异引物及1条位于负链缺口下游的特异TaqMan荧光探针.根据Plasmid-SafeTM ATP-Dependent Dnasc(PSAD)对rcDNA与cccDNA作用的不同,对模板DNA进行酶切纯化,降解reDNA,再进行套式PCR扩增,先用外引物和模板进行第一轮常规PCR,再用内引物、荧光探针和第一轮PCR产物进行实时荧光定量PCR,根据阳性参照标准品,得出待检标本定量值.结果 检测阳性参照标准品.得出该方法灵敏度可达2 lg拷贝/mL.用上述方法检测34份乙型肝炎患者血清HBV DNA阳性标本,25份血清HBVcccDNA阳性,28份外周血单个核细胞HBV cccDNA阳性.27份健康对照者血清HBV DNA阴性标本,6份HBV cccDNA阳性.对5份HBV cccDNA阳性标本扩增产物进行克隆测序,无碱基缺失、突变.与HBV不同基因型序列(A～G)比较,同源性为90.6%～99.1%,其中,与B、C基因型同源性为95.3%～99.1%,验证了方法的特异度.结论 套式-实时定量PCR法可检测乙型肝炎患者血清、PBMC中的HBV CCCDNA,且具有敏感、特异性。
其他文献
SARS冠状病毒(CoV)的主要结构蛋白包括刺突蛋白(S)、膜糖蛋白(M)、被膜蛋白(E)以及核壳蛋白(N)[1].N蛋白由422个氨基酸组成,在病毒体内含量丰富,是机体抗SARS-CoV免疫应答的主要靶蛋白之一[2]。
流行性感冒(流感)的大暴发呈现周期性,一般为二三十年暴发一次.其中1918年的西班牙流感(病毒类型H1N1)最具破坏力,全球范围内约有一半人感染患病,导致2000万～4000万人死亡。
由于乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)联合拉米夫定(LAM)能显著降低肝移植术后乙型肝炎的复发率,因此,该治疗方案已被广泛接受,用于防治肝移植术后乙型肝炎的复发。
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患者女,37岁,因持续发热,间断性上腹胀痛7周入院.7周前因发热,体温最高达40℃,间断性上腹胀痛,伴乏力、食欲不振入院(距第一次出院13 d).无畏寒及寒战。
目的 了解上海地区新型甲型H1N1流行性感冒(流感)的流行病学和临床特征,提高临床医师对本病的认识.方法 采用描述性流行病学方法对上海市公共卫生临床中心2009年5月23日至6月30日收治确诊的100例甲型H1N1流感患者资料进行回顾性分析.结果 本组患者男58例,女42例,年龄4～75岁.96例为输入性病例,主要来自澳大利亚、美国、加拿大.临床主要表现为流感样症状,包括发热、咳嗽、咽痛,其他症状
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