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摘要：【目的】了解四川攀西干熱河谷地区芒果叶中芒果苷含量的变化规律，为该地区优质芒果种植基地的芒果叶开发利用及芒果苷产品研发提供参考依据。【方法】采用高效液相色谱（HPLC）标准曲线法，按《中华人民共和国药典（一部）》要求对采集的各芒果叶样品进行精密测定，分析比较不同产地、品种、老嫩程度、生长季节和储藏期芒果叶中芒果苷含量的差异。【结果】四川攀西地区芒果叶中芒果苷含量分别比海南三亚和广西百色地区高0.8和1.7倍；品种对芒果叶中芒果苷含量有极显著影响（P<0.01，下同），以乳芒最高（6.35%），其次为金白花（4.63%）和攀育2号（4.61%），最低为红苹（1.41%）；叶片越嫩，其芒果苷含量越高，嫩叶中芒果苷含量分别是成熟叶、老叶和黄落叶的1.5、2.2和6.2倍；初花期和盛果期叶片中芒果苷含量极显著高于休眠期和营养生长期；在储藏的前3个月，芒果叶中芒果苷含量无显著变化（P>0.05），从第6个月开始极显著下降，储藏1年左右的芒果叶中芒果苷含量下降约53%。【结论】产地、品种、季节、老嫩程度和储藏期均对芒果叶中芒果苷含量有显著影响，可选择攀西地区的乳芒、金白花、攀育2号等品种初花期至盛果期的嫩叶或成熟叶作为芒果苷提取的优质原料。
关键词： 芒果叶；芒果苷；含量变化；攀西地区
中图分类号： S646.19 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016）12-2134-05
Abstract：【Objective】The present study was conducted to investigate the variation rules of mangiferin of mango leaves in dry-hot valley area in Panxi region， Sichuan province， in order to provide references for exploitation of mango leaves and development of mangiferin products in mango planting areas in Panxi region. 【Method】Using high performance liquid chromatography（HPLC） standard curve method， collected mango leaf samples were determined accurately according to standards in Pharmacopoeia of the People’s Republic of China（Part One）. Mangiferin contents in mangos of different producing areas， varieties， maturities， growth seasons and storage periods were analyzed. 【Result】The mangiferin content in mango leaves in Panxi region was 0.8 times more than that in Sanya and 1.7 times more than that in Baise. Variety made significant difference（P<0.01， the same below） in mangiferin content in mango leaves. Mangiferin content in Milk Mans was the highest（6.35%）， followed by White Gold（4.63%） and PY2（4.61%）； it was the lowest in Red Apple（1.41%）. The older the mango leaves became， the less mangiferin content was detected. Mangiferin content in tender leaves was as 1.5 times as that in mature leaves， 2.2 times in old leaves and 6.2 times in defoliation. Mangiferin contents at flowering period and fruiting period were significantly higher than those at dormancy period and nutrient growing period. In the first three months of storage， there was no significant changes（P>0.05） in mangiferin contents. From the sixth month of storage， the mangiferin contents started to decline and decreased by 53% after one year of storage. 【Conclusion】Producing area， variety， maturity， growth season and storage period can influence mangiferin contents in mango leaves significantly. Tender leaves and mature leaves of Milk Mans， White Gold and PY2 at flowering period and fruiting period in Panxi region are quality materials for mangiferin extraction. Key words： mango leaves； mangiferin； content variation； Panxi region
0 引言
【研究意義】四川省攀枝花市和西昌市低山区（合称攀西地区）地处南亚热带干热河谷气候带，该地区种植的芒果具有纤维少、味甜芳香、质地腻滑、营养丰富的优良品质，占据国内晚熟芒果市场，被国家列为今后重点扶持发展的优质农产品商品生产基地。芒果叶中富含芒果苷（邹登峰等，2010；胥秀英等，2011），芒果苷具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫、降血糖、降尿酸、护肝利胆、祛痰止咳、抗炎镇痛等多种药理作用（Pardo-Andreu et al.，2006；黄潇和彭志刚，2007；邓家刚等，2008；Lee et al.，2009；Hou et al.，2010；Viswanadh et al.，2010），是我国药典中规定的多种传统中药材和中成药的质量指标控制成分。因此，了解攀西干热河谷地区芒果叶中芒果苷含量变化规律，对充分利用攀西干热河谷地区丰富的芒果叶资源及研发芒果苷产品具有重要意义。【前人研究进展】目前已有不少学者对芒果叶中的芒果苷含量进行对比研究，且研究对象主要为广西芒果品种。李学坚和邓家刚（2007）比较广西田阳县芒果树不同部位的芒果苷含量，结果表明，以嫩芽和叶片中含量最高（>1%），而茎、皮、根和果实中含量均在1%以下。邹登峰等（2010）对广西百色和南宁地区8个品种芒果叶中芒果苷含量进行测定分析，结果表明，芒果叶中芒果苷含量均在1%以上，但不同品种芒果叶中芒果苷含量存在极显著差异。胥秀英等（2011）对芒果果实不同部位的芒果苷含量进行测定，结果表明果皮及果肉中芒果苷含量均低于0.03%。谢宇奇等（2014）采用紫外—可见吸收光谱法测定广西百色11个芒果品种叶片中的芒果苷含量，结果发现芒果苷含量范围为11.493～16.675 μg/mL，品种间差异不明显。杨克沙等（2014）利用高效液相色谱法测定云南16个芒果品种的叶、果皮和果肉中芒果苷含量，结果发现芒果叶中芒果苷含量最高，芒果肉中含量最低，以元江虎豹牙芒果叶中芒果苷含量最高。【本研究切入点】攀西干热河谷地区种植的芒果多为晚熟品种，而我国广西、海南等地区多种植早熟芒果品种。目前，尚无有关攀西干热河谷气候条件下晚熟芒果的芒果苷含量变化规律的研究报道。【拟解决的关键问题】对不同产地、品种、老嫩程度、生长季节和储藏期的芒果叶中芒果苷含量进行系统比较分析，掌握攀西干热河谷气候条件下芒果叶中芒果苷含量及其变化规律，为芒果苷产品研发及芒果叶的综合开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
供试材料为不同产地、品种、老嫩程度、生长季节和储藏期的芒果叶。芒果苷标准品（批号100268- 200401，纯度98.2%）购自中国药品生物制品检定所；高效液相色谱（HPLC）流动相用乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为国产分析纯。主要仪器设备：Agilent 1200高效液相色谱仪、Agilent 1200高效液相色谱仪工作站（美国Agilent公司），XS205DU电子天平（梅特勒—托利多仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（上海琅玕实验设备有限公司），FS-6D流水式粉碎机（广州雷迈机械设备有限公司），SYU-3-100D超声波提取器（郑州生元仪器有限公司）。
1. 2 试验设计
1. 2. 1 不同产地芒果叶的芒果苷含量比较 分别从四川省攀枝花市东区新九乡、广西百色市田东县平马镇和海南省三亚市崖城镇3个产地采集凯特芒果初花期枝条中部的成熟叶片，测定比较不同产地芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 2 不同品种芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集乳芒、吉禄、鹰嘴芒、热研16号、攀育2号、红苹、金白花、贵妃、海顿、马亚、凯特、热农10号和椰香13个品种芒果的初花期枝条中部成熟叶片，测定比较不同品种芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 3 不同老嫩程度芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集凯特芒果树初花期的地上黄落叶（简称黄落叶）、枝条下部老叶片（简称老叶）、枝条中部成熟叶（简称成熟叶）和枝条顶端嫩叶（简称嫩叶），测定比较不同老嫩程度芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 4 不同生长季节芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集凯特芒果树休眠期、营养生长期、初花期和盛果期4个生长期的成熟叶，测定比较不同生长季节芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 5 不同储藏期芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中采集凯特芒果树初花期成熟叶，自然晒干，室温遮光自然堆放储存于室内，分别在刚采集及储存后的第3、6、9和12个月测定芒果叶中芒果苷含量。
1. 3 芒果苷含量测定
按照《中华人民共和国药典（一部）》方法（国家药典委员会，2015），采用HPLC标准曲线法测定芒果叶中芒果苷含量。
1. 3. 1 样品处理 将各芒果叶样品于60 ℃烘干，过60目筛；精密称取约0.l g样品置于具塞锥形瓶中，加入25 mL 30%乙醇，精密称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，冷即后再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液进行测定。
1. 3. 2 色谱条件 Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15/85，v/v）；检测波长258 nm；柱温为室温；进样量20 μL。
1. 3. 3 标准品溶液配制及标准曲线绘制 用芒果苷标准品配制质量浓度分别为0.039、0.078、0.156、0.312和0.624 mg/mL的标准品溶液，按1.3.2条件绘制芒果苷标准曲线。 1. 3. 4 重复性检验 取已准确测定含量的芒果叶供试样品溶液，每隔24 h按上述方法测定1次，连续测定5次，进行重复性检验。
1. 3. 5 加样回收率测定 在已准确测定含量的芒果叶样品溶液中分别加入一定量对照品，测定加样回收率。
1. 4 统计分析
每个样品的含量测定进行3次重复，根据每个样品溶液中芒果苷含量和样品量的比值计算芒果叶中芒果苷的含量，并用SPSS 19.0（LSD法）对各样品中芒果苷含量进行差异性分析。
2 结果与分析
2. 1 测定方法的考察及标准曲线的绘制
按1.3方法测定芒果叶样品中芒果苷含量，所得芒果苷标准品和供试样品的色谱峰见图1。芒果苷色谱峰和相邻色谱峰的分离度可达1.5以上，理论板数在6000以上，符合药典测定要求（国家药典委员会， 2015）。绘制的标准曲线见图2，标准曲线方程为y=28203x+277.07（R2=0.9991），线性范围0.039～0.624 mg/mL，表明线性关系良好，测定方法可靠。
2. 2 重复性检验结果
重复性检测结果表明，5次重复测定的相对标准偏差（RSD）为0.93%，小于2.00%，表明HPLC标准曲线法重复性良好。
2. 3 加样回收试验结果
由表1可知，以HPLC标准曲线法测定芒果叶中芒果苷含量的回收率为98.5%～103.0%，平均回收率为100.7%，总体准确度较高。
2. 4 产地对芒果叶中芒果苷含量的影响
3个产地的凯特芒初花期成熟叶片中芒果苷含量对比测定结果见表2，不同产地间芒果苷含量有极显著差异（P<0.01，下同），其中攀枝花地区芒果叶中芒果苷含量分别比三亚和百色地区高0.8和1.7倍。
2. 5 品种对芒果叶中芒果苷含量的影响
13个芒果品种初花期成熟叶片中芒果苷含量对比测定结果见表3，不同品种间芒果苷含量存在极显著差异。其中，乳芒芒果叶的芒果苷含量最高（6.35%），其次为金白花（4.63%）和攀育2号（4.61%），含量最低的是红苹（1.41%）。在攀西地区栽培面积最大的凯特芒芒果叶中芒果苷含量仅为2.24%，在13个品种中排第十。
2. 6 老嫩程度对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒初花期不同老嫩程度叶片中芒果苷含量测定结果见表4，不同老嫩程度芒果叶中芒果苷含量有极显著差异，叶片越嫩其芒果苷含量越高。嫩叶中芒果苷含量分别是成熟叶、老叶和黄落叶的1.5、2.2和6.2倍。
2. 7 生长季节对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒不同生长季节成熟叶片中芒果苷含量测定结果见表5，不同生长季节芒果叶中芒果苷含量有一定差异，其中初花期和盛果期的叶片中芒果苷含量无显著差异（P>0.05，下同），但二者极显著高于休眠期和营养生长期。
2. 8 储藏期对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒不同储藏期成熟叶片中芒果苷含量测定结果见表6，在储藏的前3个月，叶片中芒果苷含量无显著变化，但从第6个月开始芒果苷含量极显著下降，储藏1年左右的芒果叶中芒果苷含量下降约53%。
3 讨论
本研究结果表明，攀枝花芒果叶的芒果苷含量远高于三亚的芒果叶，而三亚芒果叶的芒果苷含量远高于百色的芒果叶。根据气象资料，攀西干热河谷区全年日照时数长达2500 h以上，位居全国第二（仅低于拉萨地区），且年均太阳辐射总量（日照强度）在6000 MJ以上，全年最高昼夜温差达13 ℃以上。一般来说，日照越强，昼夜温差越大，就越有利于植物中次生代谢产物的积累。因此，攀西地区芒果叶中芒果苷含量远高于其他地区，很可能与当地充足的日照和较大的昼夜温差有关。
李学坚和邓家刚（2007）、邹登峰等（2010）对广西地区不同品种芒果叶中芒果苷含量进行比较分析，发现不同品种芒果叶的芒果苷含量间存在显著差异，本研究结果与前人研究结果基本相同，攀西地区不同品种芒果叶中芒果苷含量有较大差异。乳芒芒果叶的芒果苷含量最高（6.35%），但乳芒为攀西地区传统种植老品种，果实品质欠佳，近年来在逐步淘汰，目前在该地区种植面积不足67 ha。攀西地区种植面积最大的芒果品种是凯特芒，已达2万多ha，但凯特芒叶片中芒果苷含量并不高（2.24%）。攀枝花市农林科学研究院新选育的攀育2号和大力推广的金白花芒果叶的芒果苷含量均较高，其叶片具有较高的药用价值。乳芒等传统芒果老品种的叶片中芒果苷含量极高，具有独特的药用价值，值得进一步保留和研究。
叶片老嫩程度对芒果叶中芒果苷含量有极显著影响，嫩叶中芒果苷含量远高于老叶和黄落叶。因此，用于芒果苷提取的芒果叶最好选用每年芒果园修枝剪下的嫩叶和成熟叶。此外，也可在休眠季前后采集芒果树枝条下部的老叶作为芒果苷提取的原料。而黄落叶芒果苷含量低，利用价值小。
生长季节对芒果叶中芒果苷含量也有显著影响，初花期和盛果期葉片中芒果苷含量极显著高于休眠期和营养生长期。但从总体上看，生长季节对芒果苷含量影响有限，仍可选择在盛果期后至休眠期芒果叶作为芒果苷提取的原料。
储藏时间对芒果叶中芒果苷含量也有显著影响。在储藏的前3个月，芒果苷含量变化小，但从第6个月开始芒果苷含量显著下降。因此，用于提取芒果苷的芒果叶在采集后3个月内使用为宜。
目前，市面上的芒果苷主要从中药材知母中提取。知母中芒果苷含量一般在0.70%以上，最高也未超过1.50%（吴薛明等，2011；邓海鸣等，2013）。而芒果叶中芒果苷含量高于知母，即使休眠期的老芒果叶的芒果苷含量大多也在1.50%以上，且芒果叶的价格远低于知母药材，故从芒果叶中获取芒果苷是最低廉高效的途径。
4 结论 产地、品种、季节、老嫩程度和储藏期均对芒果叶中芒果苷含量有显著影响，攀西地区芒果叶中芒果苷含量远高于我国其他地区，可选择该地区的乳芒、金白花、攀育2号等品种初花期至盛果期的嫩叶或成熟叶作为芒果苷提取的优质原料。
参考文献：
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（責任编辑 罗 丽）
关键词： 芒果叶；芒果苷；含量变化；攀西地区
中图分类号： S646.19 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016）12-2134-05
Abstract：【Objective】The present study was conducted to investigate the variation rules of mangiferin of mango leaves in dry-hot valley area in Panxi region， Sichuan province， in order to provide references for exploitation of mango leaves and development of mangiferin products in mango planting areas in Panxi region. 【Method】Using high performance liquid chromatography（HPLC） standard curve method， collected mango leaf samples were determined accurately according to standards in Pharmacopoeia of the People’s Republic of China（Part One）. Mangiferin contents in mangos of different producing areas， varieties， maturities， growth seasons and storage periods were analyzed. 【Result】The mangiferin content in mango leaves in Panxi region was 0.8 times more than that in Sanya and 1.7 times more than that in Baise. Variety made significant difference（P<0.01， the same below） in mangiferin content in mango leaves. Mangiferin content in Milk Mans was the highest（6.35%）， followed by White Gold（4.63%） and PY2（4.61%）； it was the lowest in Red Apple（1.41%）. The older the mango leaves became， the less mangiferin content was detected. Mangiferin content in tender leaves was as 1.5 times as that in mature leaves， 2.2 times in old leaves and 6.2 times in defoliation. Mangiferin contents at flowering period and fruiting period were significantly higher than those at dormancy period and nutrient growing period. In the first three months of storage， there was no significant changes（P>0.05） in mangiferin contents. From the sixth month of storage， the mangiferin contents started to decline and decreased by 53% after one year of storage. 【Conclusion】Producing area， variety， maturity， growth season and storage period can influence mangiferin contents in mango leaves significantly. Tender leaves and mature leaves of Milk Mans， White Gold and PY2 at flowering period and fruiting period in Panxi region are quality materials for mangiferin extraction. Key words： mango leaves； mangiferin； content variation； Panxi region
0 引言
【研究意義】四川省攀枝花市和西昌市低山区（合称攀西地区）地处南亚热带干热河谷气候带，该地区种植的芒果具有纤维少、味甜芳香、质地腻滑、营养丰富的优良品质，占据国内晚熟芒果市场，被国家列为今后重点扶持发展的优质农产品商品生产基地。芒果叶中富含芒果苷（邹登峰等，2010；胥秀英等，2011），芒果苷具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫、降血糖、降尿酸、护肝利胆、祛痰止咳、抗炎镇痛等多种药理作用（Pardo-Andreu et al.，2006；黄潇和彭志刚，2007；邓家刚等，2008；Lee et al.，2009；Hou et al.，2010；Viswanadh et al.，2010），是我国药典中规定的多种传统中药材和中成药的质量指标控制成分。因此，了解攀西干热河谷地区芒果叶中芒果苷含量变化规律，对充分利用攀西干热河谷地区丰富的芒果叶资源及研发芒果苷产品具有重要意义。【前人研究进展】目前已有不少学者对芒果叶中的芒果苷含量进行对比研究，且研究对象主要为广西芒果品种。李学坚和邓家刚（2007）比较广西田阳县芒果树不同部位的芒果苷含量，结果表明，以嫩芽和叶片中含量最高（>1%），而茎、皮、根和果实中含量均在1%以下。邹登峰等（2010）对广西百色和南宁地区8个品种芒果叶中芒果苷含量进行测定分析，结果表明，芒果叶中芒果苷含量均在1%以上，但不同品种芒果叶中芒果苷含量存在极显著差异。胥秀英等（2011）对芒果果实不同部位的芒果苷含量进行测定，结果表明果皮及果肉中芒果苷含量均低于0.03%。谢宇奇等（2014）采用紫外—可见吸收光谱法测定广西百色11个芒果品种叶片中的芒果苷含量，结果发现芒果苷含量范围为11.493～16.675 μg/mL，品种间差异不明显。杨克沙等（2014）利用高效液相色谱法测定云南16个芒果品种的叶、果皮和果肉中芒果苷含量，结果发现芒果叶中芒果苷含量最高，芒果肉中含量最低，以元江虎豹牙芒果叶中芒果苷含量最高。【本研究切入点】攀西干热河谷地区种植的芒果多为晚熟品种，而我国广西、海南等地区多种植早熟芒果品种。目前，尚无有关攀西干热河谷气候条件下晚熟芒果的芒果苷含量变化规律的研究报道。【拟解决的关键问题】对不同产地、品种、老嫩程度、生长季节和储藏期的芒果叶中芒果苷含量进行系统比较分析，掌握攀西干热河谷气候条件下芒果叶中芒果苷含量及其变化规律，为芒果苷产品研发及芒果叶的综合开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
供试材料为不同产地、品种、老嫩程度、生长季节和储藏期的芒果叶。芒果苷标准品（批号100268- 200401，纯度98.2%）购自中国药品生物制品检定所；高效液相色谱（HPLC）流动相用乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为国产分析纯。主要仪器设备：Agilent 1200高效液相色谱仪、Agilent 1200高效液相色谱仪工作站（美国Agilent公司），XS205DU电子天平（梅特勒—托利多仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（上海琅玕实验设备有限公司），FS-6D流水式粉碎机（广州雷迈机械设备有限公司），SYU-3-100D超声波提取器（郑州生元仪器有限公司）。
1. 2 试验设计
1. 2. 1 不同产地芒果叶的芒果苷含量比较 分别从四川省攀枝花市东区新九乡、广西百色市田东县平马镇和海南省三亚市崖城镇3个产地采集凯特芒果初花期枝条中部的成熟叶片，测定比较不同产地芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 2 不同品种芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集乳芒、吉禄、鹰嘴芒、热研16号、攀育2号、红苹、金白花、贵妃、海顿、马亚、凯特、热农10号和椰香13个品种芒果的初花期枝条中部成熟叶片，测定比较不同品种芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 3 不同老嫩程度芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集凯特芒果树初花期的地上黄落叶（简称黄落叶）、枝条下部老叶片（简称老叶）、枝条中部成熟叶（简称成熟叶）和枝条顶端嫩叶（简称嫩叶），测定比较不同老嫩程度芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 4 不同生长季节芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中分别采集凯特芒果树休眠期、营养生长期、初花期和盛果期4个生长期的成熟叶，测定比较不同生长季节芒果叶中芒果苷含量。
1. 2. 5 不同储藏期芒果叶的芒果苷含量比较 从攀枝花市农林科学研究院芒果种植园中采集凯特芒果树初花期成熟叶，自然晒干，室温遮光自然堆放储存于室内，分别在刚采集及储存后的第3、6、9和12个月测定芒果叶中芒果苷含量。
1. 3 芒果苷含量测定
按照《中华人民共和国药典（一部）》方法（国家药典委员会，2015），采用HPLC标准曲线法测定芒果叶中芒果苷含量。
1. 3. 1 样品处理 将各芒果叶样品于60 ℃烘干，过60目筛；精密称取约0.l g样品置于具塞锥形瓶中，加入25 mL 30%乙醇，精密称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，冷即后再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液进行测定。
1. 3. 2 色谱条件 Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15/85，v/v）；检测波长258 nm；柱温为室温；进样量20 μL。
1. 3. 3 标准品溶液配制及标准曲线绘制 用芒果苷标准品配制质量浓度分别为0.039、0.078、0.156、0.312和0.624 mg/mL的标准品溶液，按1.3.2条件绘制芒果苷标准曲线。 1. 3. 4 重复性检验 取已准确测定含量的芒果叶供试样品溶液，每隔24 h按上述方法测定1次，连续测定5次，进行重复性检验。
1. 3. 5 加样回收率测定 在已准确测定含量的芒果叶样品溶液中分别加入一定量对照品，测定加样回收率。
1. 4 统计分析
每个样品的含量测定进行3次重复，根据每个样品溶液中芒果苷含量和样品量的比值计算芒果叶中芒果苷的含量，并用SPSS 19.0（LSD法）对各样品中芒果苷含量进行差异性分析。
2 结果与分析
2. 1 测定方法的考察及标准曲线的绘制
按1.3方法测定芒果叶样品中芒果苷含量，所得芒果苷标准品和供试样品的色谱峰见图1。芒果苷色谱峰和相邻色谱峰的分离度可达1.5以上，理论板数在6000以上，符合药典测定要求（国家药典委员会， 2015）。绘制的标准曲线见图2，标准曲线方程为y=28203x+277.07（R2=0.9991），线性范围0.039～0.624 mg/mL，表明线性关系良好，测定方法可靠。
2. 2 重复性检验结果
重复性检测结果表明，5次重复测定的相对标准偏差（RSD）为0.93%，小于2.00%，表明HPLC标准曲线法重复性良好。
2. 3 加样回收试验结果
由表1可知，以HPLC标准曲线法测定芒果叶中芒果苷含量的回收率为98.5%～103.0%，平均回收率为100.7%，总体准确度较高。
2. 4 产地对芒果叶中芒果苷含量的影响
3个产地的凯特芒初花期成熟叶片中芒果苷含量对比测定结果见表2，不同产地间芒果苷含量有极显著差异（P<0.01，下同），其中攀枝花地区芒果叶中芒果苷含量分别比三亚和百色地区高0.8和1.7倍。
2. 5 品种对芒果叶中芒果苷含量的影响
13个芒果品种初花期成熟叶片中芒果苷含量对比测定结果见表3，不同品种间芒果苷含量存在极显著差异。其中，乳芒芒果叶的芒果苷含量最高（6.35%），其次为金白花（4.63%）和攀育2号（4.61%），含量最低的是红苹（1.41%）。在攀西地区栽培面积最大的凯特芒芒果叶中芒果苷含量仅为2.24%，在13个品种中排第十。
2. 6 老嫩程度对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒初花期不同老嫩程度叶片中芒果苷含量测定结果见表4，不同老嫩程度芒果叶中芒果苷含量有极显著差异，叶片越嫩其芒果苷含量越高。嫩叶中芒果苷含量分别是成熟叶、老叶和黄落叶的1.5、2.2和6.2倍。
2. 7 生长季节对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒不同生长季节成熟叶片中芒果苷含量测定结果见表5，不同生长季节芒果叶中芒果苷含量有一定差异，其中初花期和盛果期的叶片中芒果苷含量无显著差异（P>0.05，下同），但二者极显著高于休眠期和营养生长期。
2. 8 储藏期对芒果叶中芒果苷含量的影响
凯特芒不同储藏期成熟叶片中芒果苷含量测定结果见表6，在储藏的前3个月，叶片中芒果苷含量无显著变化，但从第6个月开始芒果苷含量极显著下降，储藏1年左右的芒果叶中芒果苷含量下降约53%。
3 讨论
本研究结果表明，攀枝花芒果叶的芒果苷含量远高于三亚的芒果叶，而三亚芒果叶的芒果苷含量远高于百色的芒果叶。根据气象资料，攀西干热河谷区全年日照时数长达2500 h以上，位居全国第二（仅低于拉萨地区），且年均太阳辐射总量（日照强度）在6000 MJ以上，全年最高昼夜温差达13 ℃以上。一般来说，日照越强，昼夜温差越大，就越有利于植物中次生代谢产物的积累。因此，攀西地区芒果叶中芒果苷含量远高于其他地区，很可能与当地充足的日照和较大的昼夜温差有关。
李学坚和邓家刚（2007）、邹登峰等（2010）对广西地区不同品种芒果叶中芒果苷含量进行比较分析，发现不同品种芒果叶的芒果苷含量间存在显著差异，本研究结果与前人研究结果基本相同，攀西地区不同品种芒果叶中芒果苷含量有较大差异。乳芒芒果叶的芒果苷含量最高（6.35%），但乳芒为攀西地区传统种植老品种，果实品质欠佳，近年来在逐步淘汰，目前在该地区种植面积不足67 ha。攀西地区种植面积最大的芒果品种是凯特芒，已达2万多ha，但凯特芒叶片中芒果苷含量并不高（2.24%）。攀枝花市农林科学研究院新选育的攀育2号和大力推广的金白花芒果叶的芒果苷含量均较高，其叶片具有较高的药用价值。乳芒等传统芒果老品种的叶片中芒果苷含量极高，具有独特的药用价值，值得进一步保留和研究。
叶片老嫩程度对芒果叶中芒果苷含量有极显著影响，嫩叶中芒果苷含量远高于老叶和黄落叶。因此，用于芒果苷提取的芒果叶最好选用每年芒果园修枝剪下的嫩叶和成熟叶。此外，也可在休眠季前后采集芒果树枝条下部的老叶作为芒果苷提取的原料。而黄落叶芒果苷含量低，利用价值小。
生长季节对芒果叶中芒果苷含量也有显著影响，初花期和盛果期葉片中芒果苷含量极显著高于休眠期和营养生长期。但从总体上看，生长季节对芒果苷含量影响有限，仍可选择在盛果期后至休眠期芒果叶作为芒果苷提取的原料。
储藏时间对芒果叶中芒果苷含量也有显著影响。在储藏的前3个月，芒果苷含量变化小，但从第6个月开始芒果苷含量显著下降。因此，用于提取芒果苷的芒果叶在采集后3个月内使用为宜。
目前，市面上的芒果苷主要从中药材知母中提取。知母中芒果苷含量一般在0.70%以上，最高也未超过1.50%（吴薛明等，2011；邓海鸣等，2013）。而芒果叶中芒果苷含量高于知母，即使休眠期的老芒果叶的芒果苷含量大多也在1.50%以上，且芒果叶的价格远低于知母药材，故从芒果叶中获取芒果苷是最低廉高效的途径。
4 结论 产地、品种、季节、老嫩程度和储藏期均对芒果叶中芒果苷含量有显著影响，攀西地区芒果叶中芒果苷含量远高于我国其他地区，可选择该地区的乳芒、金白花、攀育2号等品种初花期至盛果期的嫩叶或成熟叶作为芒果苷提取的优质原料。
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（責任编辑 罗 丽）