【摘 要】
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目的 建立一种单标记延伸(OLE)结合荧光偏振技术(FP)快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法.方法 从GenBank下载By和Bv血凝素(HA)基因各50条序列,通过MEGA软件进行分析,利用Prim
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心,广东深圳,518055;深圳市慢性病防治中心
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目的 建立一种单标记延伸(OLE)结合荧光偏振技术(FP)快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法.方法 从GenBank下载By和Bv血凝素(HA)基因各50条序列,通过MEGA软件进行分析,利用Primer Premier 5.0设计B型流感病毒亚系特异性引物和单标记延伸引物,RT-PCR扩增目的片段,用OLE引物添加亚系特异性荧光标记的双脱氧核糖核苷酸,建立单碱基延伸终止荧光偏振检测方法.结果 RT-PCR扩增产物的大小分别为349、397和713 bp.OLE sense引物检测Bv亚系双脱氧三磷酸胸苷(ddTTP)的FP值高于双脱氧三磷酸胞苷(ddCTP)的FP值(P＜0.01),而By亚系则正好相反,ddCTP的FP值高于ddTTP(P＜0.01)；OLE anti-sense引物检测Bv亚系和By亚系ddGTP和ddATP的FP值均差别不大(均P＞0.05).Bv样品毒株ddTTP的FP值均值为(159±10)mp,与Bv参照株(162 mp)相近；By样品毒株ddCTP的FP值均值为(163±10)mp,与By参照株(165 mp)相近.结论 该方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断.
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