试验对牛奶中的土霉素残留检测方法进行了改进,并采用改进后的方法对牛奶中土霉素的临床消除情况进行了探究.样品前处理过程中,选取0.1 mol/L Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取牛奶中的土霉素,正己烷除脂及HLB固相萃取柱净化浓缩.采用Symmetry Shield RP C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)反相色谱柱,以乙腈和0.048％的磷酸溶液(pH 2.5)为流动相,采用梯度洗脱的方式对样品进行分析.方法改进后,土霉素的出峰时间为6.5 min,峰形尖锐,与样品中的杂质峰分离良好.土霉素标准溶液在5～2 000 μg/kg范围内线性关系良好,标准曲线R2 =0.9999;牛奶中土霉素在10、20、100 μg/kg 3组浓度的加标回收率分别为87.9％、90.5％和87.8％,批内变异系数范围为2.2％～5.8％,批间变异系数范围为4.0％～5.1％.土霉素在牛奶中的检出限为5 μg/kg,定量限为10 μg/kg,适用于研究土霉素在牛奶中的残留消除规律.选取了29头产后患有子宫内膜炎的奶牛,分成4个不同剂量组(2、3、4和5 g),通过子宫内灌注土霉素的方式进行治疗,然后采用优化后的方法检测牛奶中残留的土霉素.结果发现,4 g及以下剂量组给药72 h后,牛奶中的土霉素可以消除至残留限量以下;而当给药剂量达到5 g时,72 h后牛奶中的土霉素未消除至残留限量以下,因此不建议采用5 g及以上剂量灌注病牛子宫.