【摘 要】
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目的 探讨结核分枝杆菌katG基因突变TGG328TTT(Trp328Phe)对异烟肼耐药性的影响. 方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床突变株DNA为模板,采用PCR扩增野生型和双突变型(含Trp
【机 构】
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中山大学附属第三医院呼吸科,广东广州510630;赣南医学院第一附属医院呼吸科,江西赣州341000;中山大学生命科学院,广东广州510275
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目的 探讨结核分枝杆菌katG基因突变TGG328TTT(Trp328Phe)对异烟肼耐药性的影响. 方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床突变株DNA为模板,采用PCR扩增野生型和双突变型(含Trp328Phe与Met420Thr)katG基因,采用重叠延伸PCR技术构建单突变型(Trp328Phe) katG基因.将各katG基因重组至质粒pET22b(+),再导入表达宿主菌BL21 (DE3) pLySs中,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对重组KatG蛋白进行分离纯化.通过各重组KatG蛋白与过氧化氢和邻联大茴香胺反应,检测受试菌过氧化氢酶和过氧化物酶的活性. 结果 成功获得纯化的KatG蛋白.相比野生型KatG(19.05 U/mg和7.05×103 U/mg),单突变型KatG(10.50 U/mg和2.23×103 U/mg)过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降44.9%和68.3%,双突变型KatG(11.88 U/mg和3.31×103 U/mg)则分别下降37.6%和53.0%. 结论 katG基因(Trp328Phe)突变引起KatG酶活性部分缺失,与异烟肼耐药有关,可作为耐药菌株基因检测的标志用于基因芯片的开发.双突变时KatG蛋白活性较高,提示katG-328TTT具有代偿性突变的作用.
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