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[摘 要] 通过对青蒿生长过程中青蒿素的测定，指导种植户收割青蒿最佳时期、青蒿叶末合理制备、种植区域，防止盲目收割野生青蒿而破坏生态平衡，导致资源枯竭，同时还可提高资源的利用率，增加经济效益。
[关键词] 青蒿；收割时期；青蒿叶末
疟疾是世界上流行非常广，发病率和死亡率都非常高的热带寄生虫传染病。据世界卫生组织的报告，世界上有100多个国家为疟疾流行区，全球约25亿人生活在疫区，约22亿人受疟疾的威胁，每年有300万-500万疟疾临床病例，病死人数为110-270万，在非洲，对治疗疟疾有效药物的需求是非常巨大的[1]。因此，种植、开发青蒿很有前景。另外，这种病能影响儿童生长和发盲，导致贫血和出生低体重儿、孕妇得妇科病和贫血等[2]。
青蒿入药在《神农本草经》、《本草纲目》等书中均有记载。1972年我国科学家在整理民间验方及实践的基础上从青蒿中分离出这种活性物质（青蒿素）。青蒿素类药物是中国人自主研发的拥有知识产权的中药药物，其治疗恶性疟疾效果尤其显著，世界卫生组织己将其作为治疗疟疾的基本药物。随着对该类药物药理作用研究的不断深人，证实此类药均具有抗药、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、抗弓形虫、抗类风湿性关节炎、抗心律失常、抗菌素肿瘤细胞毒性、抗免疫、结核病潮热、中暑、皮肤痛、蕁麻疹、脂溢性皮炎、灭蚊和解热等作用[3]。此外，还有治疗艾滋病、黑热病、红班狼疮及白血病等病的作用[4]。近年来研究发现青蒿素对血癌和乳腺癌细胞具有高选择性，是其他化学疗法的100倍，而且青蒿素可以杀死癌细胞，但不伤害周围健康细胞[5]。青蒿素类产业主要原料资源在中国，世界卫生组织及联合国儿基会对中国青蒿素类药物需求量大，现有产量远远不能满足市场需要。
青蒿素是一年生草本植物，为菊科艾属植物黄花蒿。株高40-150cm以上，全生育期120d左右。喜湿润、忌干旱、怕渍水，光照要求充足。青蒿素原料是武陵山区的青蒿草，该区域地理环境、气候条件适合青蒿的生长，尤其是乌江流域中下流（秀山、酉阳、彭水、黔江、武隆、涪陵）地处武陵山区，拥有丰富的野生青蒿资源，全球青蒿供应量80%来自重庆酉阳，世界卫生组织2005年从酉阳购买了1亿剂量的青蒿素类抗疟药。现在，青蒿素用药缺口每年为总需求的40-60%，估计填补全球青蒿种植的空缺需要15-20年[6]。因此，野生青蒿远远不能满足市场需要，同时长期采伐会造成生态平衡失调，人工种植面积也较少，为解决供需矛盾，要把重庆市切实建成全球最大青蒿供应基地，就应该利用好乌江流域的地理环境优势，扩大种植优质青蒿已迫在眉睫，这样不但能解决青蒿素的国际市场的需求，也能保护野生资源和带动地方经济发展。青蒿素药材分布广泛，且类似品种较多，类型混杂，不同产地，不同生长期青蒿素含量差异较大，据测定，欧洲和美国青蒿中青莆素的含量在0.03%-0.22%之间[7]，中国和越南人工种植的青蒿中青蒿素含量平均在0.3%-0.8%之间，乌江流城含量最高（酉阳野生青蒿中青蒿素含量至今保持全国最高记录0.9%-1.3%）[8]。为了更好、更充分地利用乌江流域独有的地理环境和气候条件，提高资源的利用率，增加经济效益，指导农民正确种植、适时收割、合理制备青蒿叶末意义重大，同时还为乌江流域青蒿的质量评价和进一步加速开发该中药资源提供科学依据。
一、试验部分
1.监测点选择
以乌江流域中下游为主干，从上游至下游，按海拨从高至低的顺序，选择了秀山（平均种植海拨高度900m）、酉阳（平均种植海拨高度700m）、彭水（平均种植海拨高度600m）、武隆（平均种植海拨高度500m）、涪陵（平均种植海拨高度300m）五个区县，较大型（0.6一1.33hm2）种植户5户作为监测对象。
2.种植户土质要求
根据青蒿最佳生长条件要求，海拨在800m以下的灰棕紫泥土（五区的土质有60%为灰棕紫泥土）均可种植。
3.品种选择
选择高质、稳产、耐旱、抗病、节肥、省力且在重庆大面积推广的优良青蒿品种（市购）
4.田间管理和试验要求
将良种青蒿种子，统一发放给五区种植户，由专职的农技员根据青蒿的生长特性，对农户进行统一规划，统一管理。具体要求如下：
（1）播种时间：乌江沿岸海拨1000m以下区域，每年3月中旬期间均可播种，五个监测区播种时间统一定为3月15-30日。
（2）幼苗假植：应选择浇水方便的土地，起厢种植。要求厢面积宽1·2m，假植规格株行距10一l5cm。假植后加强肥水管理，可用腐熟人粪尿或亩用复合肥5Kg冲粪水淋施，做到勤施薄施。大约假植18-20d左右（气温低时约需20-25d），当植株生长到l0cm-l5cm时，即可移至土壤或大田种植。
（3）移栽地准备：土壤经深翻梨耙、碎土，每亩施腐熟农家肥或土杂肥1000-1200Kg，磷肥25-30Kg作基肥，开沟起厢种植。起厢规格为：宽1.2m，沟宽0.4m，沟探0.2-0.5m，每厢种两行，株行距为0.8X0.8m-
（4）适时移栽当假植苗达到10-l5cm时进行移栽，移栽时选择阴天或睛天下午进行。栽后淋足定根水。合理密植，亩植1000株左右。
（5）田间管埋：移栽后应加强田间管理。做到科学施肥，合理排灌。可分三个阶段施肥，第一个阶段：移栽一个皇期左右轻施复合肥或农家肥，亩用复合肥5-7K9或用0·3%的复合肥水淋施：第二阶段：移栽15-20d，每亩开穴施复合肥l4K9左右或腐熟农家肥，施肥后进行复土。第三阶段：移栽35-45d后，亩施25Kg复合肥或农家肥，结合培土。大田种植要防渍水，在雨季注重排除渍水，干旱时要及时浇灌。
（6）病虫害防治
①病害 青蒿主要病害是茎腐病。在多雨季节，如发生茎腐病，可用灭菌威或托布津防治。
②虫害 青篙主要害虫有蚜虫，应在其迁飞扩散前喷药，亩用40%乐果或20%速灭丁或蚜虱净等喷雾防治。 5.监测对象
五区人工种植的青蒿幼苗、返青苗、花蕾初期（老枝出现花蕾）、花蕾期（花蕾初期的第3d作为花蕾1期，以后每3d作为1个花蕾期）、成熟晚期（花蕾再生极少且有少许叶再泛黄）青蒿子叶，在对应时期采集野生青篙同时进行青蒿素的测定。
6.样品采集和制各
每个监测基地按五点法采集，野生青蒿随机采集。取其子叶，在晒场晒干，打落其子叶，子叶继续晒干至符合收购要求或取其子叶在800C的烤箱中杀青30min，随后在400C的烤箱中烘烤至恒重。将干子叶粉碎过60目筛制成叶末，留作检测用。
7.青篙素检测
（1）样品处理：精确称取青蒿叶末约0·5-1·09g于烧杯中，加入50mL石油醚，振摇30min，用组织匀浆机以13500r/min匀浆3min，然后转人G4垂容滤斗中进行抽滤，并不断用石油醚洗至无色，加大5OmL（20，20，10）2%氢氧化钠溶液洗涤G4垂容滤斗中的内容物，将收集的滤液在振荡器上振摇5min，弃去下层滤液中的碱液后，以蒸馏水洗至中性。经水洗后的提取液置于圆底烧瓶中以550C减压蒸馏，得到青蒿素的浸膏，最后用95%乙醇溶解，定容至50m1待测，同时作试剂空白[9]。
（2）样品测定：吸取样品处理液2·0m1，补加95%乙醇至5·0mL，最后加入0·2%氢氧化钠溶液至50mL，在550C的水浴中反应30min后取出，冷至室温。在L=l0mm，λ=292nm，以"o"管调零，测定吸光度值（A）。
（3）标准曲线的制备：按试验方法[10]进行测定[10]，绘制青蒿素浓度对吸光度的曲线，其线性方程A=21.14CS-0.02048，r为0·9997，将样品测得的吸光度值（A），按线性方程计算出青蒿叶末中青蒿素的含量（%）。
二、结果与讨论
⒈四个监测区，青篙不同生长时期，青篙素含量记录
（1）不同海拨高度在250-950m五个监测区，人工种植的青蒿，在不同生长时期，青蒿素含量（%）检测记录（见表1）
根据表1：作青蒿在整个生长过程中青蒿素含量分布图（见图1）胡不同海拔高度花蕾4期青蒿素含量分布图（见图2）。从图2可知：青蒿最宜种植在海拔高度为700m左右。
（2）不同海拨高度在250-950m五个监测区，野生青蒿，在不同生长时期，青蒿素含量（%）检测记录（见表2）
从表1和表2，我们发现：无论是人工种植还是野生青蒿，在它的整个生长过程中，以花蕾期青蒿素含量最高，尤其是在花蕾4期，青蒿素含量达到极至。
（3）选人工种植青蒿，用自然晒干和人为烘干两种方法制作青蒿叶末，其有效成分保存情况的监测记录（以青蒿素计：%）（见表3）
从表3可知 如果以人为烘干法测得的青蒿素为基质，则自然晒干比人为烘千青蒿素损失将在6-30%之间。
三、结论
1.种植青蒿最好选择在海拨高度为700m左右区域进行种植。
2.青蒿宜花蕾初期计算在第15一18日4d内收割完毕。
3.建议青蒿叶末制备方法仿照烤烟烘干法，这样可以避免因空气湿度过大或绵雨天造成不必要的损失，增加经济效益，同时提高青蒿有效成分的利用率。
4.通过该项目的研究，可以防止盲目收割野生青蒿而破坏生态平衡，导致资源枯竭。同时为武陵山区青莆的质（下转第157页）量评价和进一步加速开发该中药资源提供科学依据。
参考文献
[1] 青蒿素市场研究报告·2005.
[2] 战雅莲·006WHO批准用青蒿素治疗非洲疟疾[J].国外医药.植物药分册.2006，21（1）：70-21
[3] 郑全芳，杨志刚，孙红祥.青篙素及其衍生物药理作用研究进展[j].中国兽药杂志.2006，4（1）：40-44.
[4] WuTs，etaI.New constituents and anti platelet aggregation and anti-HIVpincipies of Artemisia capillaries [J].BioorgMedChem，2001，9（1）：77.
[5] 陈立军，靳秋月，于利人等·青篙素及其衍生物抗肿瘤研究进展「J]·中草药，2005，36（11），1754-1755
[6] 广西青蒿（黄花篙）产业发展规划.2005
[7] D.J·Charies，J.E.Sjmon，K.V.Wood，and P.Heinstein Gempiasm variation in artemisinin content of Artemisia annua using an aiternative method of naitemativemethodof出emisinina皿aIy5ifromcrudepIantextracts[J]·J·Mat·PIod·l000，5；（1），157一160.
[8] ChanK·L·，TeoC·K·H，TinadasaS，KahHayYuenSeleonofhj [J]·Plantamed，1995，61（3）：285-287
[9] 秦宗会，谢朝怀..组织匀浆法快速测定青篙素探讨.中国卫生检验杂志.2007
[10] 李中栋，周全，赵长文等.青篙素固体分散物的，备及体外溶出研究.中国药学杂志
[关键词] 青蒿；收割时期；青蒿叶末
疟疾是世界上流行非常广，发病率和死亡率都非常高的热带寄生虫传染病。据世界卫生组织的报告，世界上有100多个国家为疟疾流行区，全球约25亿人生活在疫区，约22亿人受疟疾的威胁，每年有300万-500万疟疾临床病例，病死人数为110-270万，在非洲，对治疗疟疾有效药物的需求是非常巨大的[1]。因此，种植、开发青蒿很有前景。另外，这种病能影响儿童生长和发盲，导致贫血和出生低体重儿、孕妇得妇科病和贫血等[2]。
青蒿入药在《神农本草经》、《本草纲目》等书中均有记载。1972年我国科学家在整理民间验方及实践的基础上从青蒿中分离出这种活性物质（青蒿素）。青蒿素类药物是中国人自主研发的拥有知识产权的中药药物，其治疗恶性疟疾效果尤其显著，世界卫生组织己将其作为治疗疟疾的基本药物。随着对该类药物药理作用研究的不断深人，证实此类药均具有抗药、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、抗弓形虫、抗类风湿性关节炎、抗心律失常、抗菌素肿瘤细胞毒性、抗免疫、结核病潮热、中暑、皮肤痛、蕁麻疹、脂溢性皮炎、灭蚊和解热等作用[3]。此外，还有治疗艾滋病、黑热病、红班狼疮及白血病等病的作用[4]。近年来研究发现青蒿素对血癌和乳腺癌细胞具有高选择性，是其他化学疗法的100倍，而且青蒿素可以杀死癌细胞，但不伤害周围健康细胞[5]。青蒿素类产业主要原料资源在中国，世界卫生组织及联合国儿基会对中国青蒿素类药物需求量大，现有产量远远不能满足市场需要。
青蒿素是一年生草本植物，为菊科艾属植物黄花蒿。株高40-150cm以上，全生育期120d左右。喜湿润、忌干旱、怕渍水，光照要求充足。青蒿素原料是武陵山区的青蒿草，该区域地理环境、气候条件适合青蒿的生长，尤其是乌江流域中下流（秀山、酉阳、彭水、黔江、武隆、涪陵）地处武陵山区，拥有丰富的野生青蒿资源，全球青蒿供应量80%来自重庆酉阳，世界卫生组织2005年从酉阳购买了1亿剂量的青蒿素类抗疟药。现在，青蒿素用药缺口每年为总需求的40-60%，估计填补全球青蒿种植的空缺需要15-20年[6]。因此，野生青蒿远远不能满足市场需要，同时长期采伐会造成生态平衡失调，人工种植面积也较少，为解决供需矛盾，要把重庆市切实建成全球最大青蒿供应基地，就应该利用好乌江流域的地理环境优势，扩大种植优质青蒿已迫在眉睫，这样不但能解决青蒿素的国际市场的需求，也能保护野生资源和带动地方经济发展。青蒿素药材分布广泛，且类似品种较多，类型混杂，不同产地，不同生长期青蒿素含量差异较大，据测定，欧洲和美国青蒿中青莆素的含量在0.03%-0.22%之间[7]，中国和越南人工种植的青蒿中青蒿素含量平均在0.3%-0.8%之间，乌江流城含量最高（酉阳野生青蒿中青蒿素含量至今保持全国最高记录0.9%-1.3%）[8]。为了更好、更充分地利用乌江流域独有的地理环境和气候条件，提高资源的利用率，增加经济效益，指导农民正确种植、适时收割、合理制备青蒿叶末意义重大，同时还为乌江流域青蒿的质量评价和进一步加速开发该中药资源提供科学依据。
一、试验部分
1.监测点选择
以乌江流域中下游为主干，从上游至下游，按海拨从高至低的顺序，选择了秀山（平均种植海拨高度900m）、酉阳（平均种植海拨高度700m）、彭水（平均种植海拨高度600m）、武隆（平均种植海拨高度500m）、涪陵（平均种植海拨高度300m）五个区县，较大型（0.6一1.33hm2）种植户5户作为监测对象。
2.种植户土质要求
根据青蒿最佳生长条件要求，海拨在800m以下的灰棕紫泥土（五区的土质有60%为灰棕紫泥土）均可种植。
3.品种选择
选择高质、稳产、耐旱、抗病、节肥、省力且在重庆大面积推广的优良青蒿品种（市购）
4.田间管理和试验要求
将良种青蒿种子，统一发放给五区种植户，由专职的农技员根据青蒿的生长特性，对农户进行统一规划，统一管理。具体要求如下：
（1）播种时间：乌江沿岸海拨1000m以下区域，每年3月中旬期间均可播种，五个监测区播种时间统一定为3月15-30日。
（2）幼苗假植：应选择浇水方便的土地，起厢种植。要求厢面积宽1·2m，假植规格株行距10一l5cm。假植后加强肥水管理，可用腐熟人粪尿或亩用复合肥5Kg冲粪水淋施，做到勤施薄施。大约假植18-20d左右（气温低时约需20-25d），当植株生长到l0cm-l5cm时，即可移至土壤或大田种植。
（3）移栽地准备：土壤经深翻梨耙、碎土，每亩施腐熟农家肥或土杂肥1000-1200Kg，磷肥25-30Kg作基肥，开沟起厢种植。起厢规格为：宽1.2m，沟宽0.4m，沟探0.2-0.5m，每厢种两行，株行距为0.8X0.8m-
（4）适时移栽当假植苗达到10-l5cm时进行移栽，移栽时选择阴天或睛天下午进行。栽后淋足定根水。合理密植，亩植1000株左右。
（5）田间管埋：移栽后应加强田间管理。做到科学施肥，合理排灌。可分三个阶段施肥，第一个阶段：移栽一个皇期左右轻施复合肥或农家肥，亩用复合肥5-7K9或用0·3%的复合肥水淋施：第二阶段：移栽15-20d，每亩开穴施复合肥l4K9左右或腐熟农家肥，施肥后进行复土。第三阶段：移栽35-45d后，亩施25Kg复合肥或农家肥，结合培土。大田种植要防渍水，在雨季注重排除渍水，干旱时要及时浇灌。
（6）病虫害防治
①病害 青蒿主要病害是茎腐病。在多雨季节，如发生茎腐病，可用灭菌威或托布津防治。
②虫害 青篙主要害虫有蚜虫，应在其迁飞扩散前喷药，亩用40%乐果或20%速灭丁或蚜虱净等喷雾防治。 5.监测对象
五区人工种植的青蒿幼苗、返青苗、花蕾初期（老枝出现花蕾）、花蕾期（花蕾初期的第3d作为花蕾1期，以后每3d作为1个花蕾期）、成熟晚期（花蕾再生极少且有少许叶再泛黄）青蒿子叶，在对应时期采集野生青篙同时进行青蒿素的测定。
6.样品采集和制各
每个监测基地按五点法采集，野生青蒿随机采集。取其子叶，在晒场晒干，打落其子叶，子叶继续晒干至符合收购要求或取其子叶在800C的烤箱中杀青30min，随后在400C的烤箱中烘烤至恒重。将干子叶粉碎过60目筛制成叶末，留作检测用。
7.青篙素检测
（1）样品处理：精确称取青蒿叶末约0·5-1·09g于烧杯中，加入50mL石油醚，振摇30min，用组织匀浆机以13500r/min匀浆3min，然后转人G4垂容滤斗中进行抽滤，并不断用石油醚洗至无色，加大5OmL（20，20，10）2%氢氧化钠溶液洗涤G4垂容滤斗中的内容物，将收集的滤液在振荡器上振摇5min，弃去下层滤液中的碱液后，以蒸馏水洗至中性。经水洗后的提取液置于圆底烧瓶中以550C减压蒸馏，得到青蒿素的浸膏，最后用95%乙醇溶解，定容至50m1待测，同时作试剂空白[9]。
（2）样品测定：吸取样品处理液2·0m1，补加95%乙醇至5·0mL，最后加入0·2%氢氧化钠溶液至50mL，在550C的水浴中反应30min后取出，冷至室温。在L=l0mm，λ=292nm，以"o"管调零，测定吸光度值（A）。
（3）标准曲线的制备：按试验方法[10]进行测定[10]，绘制青蒿素浓度对吸光度的曲线，其线性方程A=21.14CS-0.02048，r为0·9997，将样品测得的吸光度值（A），按线性方程计算出青蒿叶末中青蒿素的含量（%）。
二、结果与讨论
⒈四个监测区，青篙不同生长时期，青篙素含量记录
（1）不同海拨高度在250-950m五个监测区，人工种植的青蒿，在不同生长时期，青蒿素含量（%）检测记录（见表1）
根据表1：作青蒿在整个生长过程中青蒿素含量分布图（见图1）胡不同海拔高度花蕾4期青蒿素含量分布图（见图2）。从图2可知：青蒿最宜种植在海拔高度为700m左右。
（2）不同海拨高度在250-950m五个监测区，野生青蒿，在不同生长时期，青蒿素含量（%）检测记录（见表2）
从表1和表2，我们发现：无论是人工种植还是野生青蒿，在它的整个生长过程中，以花蕾期青蒿素含量最高，尤其是在花蕾4期，青蒿素含量达到极至。
（3）选人工种植青蒿，用自然晒干和人为烘干两种方法制作青蒿叶末，其有效成分保存情况的监测记录（以青蒿素计：%）（见表3）
从表3可知 如果以人为烘干法测得的青蒿素为基质，则自然晒干比人为烘千青蒿素损失将在6-30%之间。
三、结论
1.种植青蒿最好选择在海拨高度为700m左右区域进行种植。
2.青蒿宜花蕾初期计算在第15一18日4d内收割完毕。
3.建议青蒿叶末制备方法仿照烤烟烘干法，这样可以避免因空气湿度过大或绵雨天造成不必要的损失，增加经济效益，同时提高青蒿有效成分的利用率。
4.通过该项目的研究，可以防止盲目收割野生青蒿而破坏生态平衡，导致资源枯竭。同时为武陵山区青莆的质（下转第157页）量评价和进一步加速开发该中药资源提供科学依据。
参考文献
[1] 青蒿素市场研究报告·2005.
[2] 战雅莲·006WHO批准用青蒿素治疗非洲疟疾[J].国外医药.植物药分册.2006，21（1）：70-21
[3] 郑全芳，杨志刚，孙红祥.青篙素及其衍生物药理作用研究进展[j].中国兽药杂志.2006，4（1）：40-44.
[4] WuTs，etaI.New constituents and anti platelet aggregation and anti-HIVpincipies of Artemisia capillaries [J].BioorgMedChem，2001，9（1）：77.
[5] 陈立军，靳秋月，于利人等·青篙素及其衍生物抗肿瘤研究进展「J]·中草药，2005，36（11），1754-1755
[6] 广西青蒿（黄花篙）产业发展规划.2005
[7] D.J·Charies，J.E.Sjmon，K.V.Wood，and P.Heinstein Gempiasm variation in artemisinin content of Artemisia annua using an aiternative method of naitemativemethodof出emisinina皿aIy5ifromcrudepIantextracts[J]·J·Mat·PIod·l000，5；（1），157一160.
[8] ChanK·L·，TeoC·K·H，TinadasaS，KahHayYuenSeleonofhj [J]·Plantamed，1995，61（3）：285-287
[9] 秦宗会，谢朝怀..组织匀浆法快速测定青篙素探讨.中国卫生检验杂志.2007
[10] 李中栋，周全，赵长文等.青篙素固体分散物的，备及体外溶出研究.中国药学杂志