【摘 要】
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目的:探讨miR-150-5p在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化过程中的水平变化和其对hPDLSCs成骨分化的影响及相关机制.方法:采用有限稀释法分离培养hPDLSCs,对hPDLSCs进行成骨诱导,以miR-150-5p抑制物(miR-150-5p-inhibitor)及其阴性对照(miR-inhibitor-NC)转染hPDLSCs;采用real-time RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(
【机 构】
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空军军医大学第二附属医院口腔科,西安 710038;中国人民解放军西藏军区总医院口腔科,拉萨 850000
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目的:探讨miR-150-5p在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化过程中的水平变化和其对hPDLSCs成骨分化的影响及相关机制.方法:采用有限稀释法分离培养hPDLSCs,对hPDLSCs进行成骨诱导,以miR-150-5p抑制物(miR-150-5p-inhibitor)及其阴性对照(miR-inhibitor-NC)转染hPDLSCs;采用real-time RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)及miR-150-5p水平;采用蛋白质印迹法检测ALP、Runx2、OPN、β-连环蛋白(β-catenin)、转录因子4(TCF-4)及基质金属蛋白酶2(MMP2)的蛋白表达水平;使用ALP检测试剂盒测定ALP活性.结果:分离培养的hPDLSCs经成骨诱导后,其ALP、Runx2及OPN转录水平随培养天数增加逐渐升高(P<0.05),而miR-150-5p水平逐渐下降(P<0.05),即miR-150-5p水平与hPDLSCs成骨分化呈相反变化趋势;miR-150-5p-inhibitor转染的hPDLSCs中,ALP、Runx2、OPN转录及表达水平,Wnt通路分子β-catenin、TCF-4及MMP2表达水平,以及ALP活性均显著增加(均P<0.05);当miR-150-5p-inhibitor联合Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)处理hPDLSCs后,miR-150-5p下调引起的ALP、Runx2、OPN及MMP2表达和ALP活性增加均出现显著性逆转(均P<0.05).结论:MiR-150-5p下调能够通过激活Wnt信号通路促进hPDLSCs成骨分化及MMP2表达,提示低水平的miR-150-5p有利于hPDLSCs的成骨分化过程.
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