【摘 要】
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目的:探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad2基因表达,筛选高效特异性siRNA.方法:根据siRNA设计原则,针对人Smad2基因序列
【机 构】
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第二军医大学长征医院整形外科,上海,200003;第二军医大学长海医院骨科,上海,200433;中国科学院上海生物科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031;
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目的:探讨应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad2基因表达,筛选高效特异性siRNA.方法:根据siRNA设计原则,针对人Smad2基因序列特征设计Smad2 特异siRNA(1-3),转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,RT-PCR检测siRNA对Smad2基因的抑制效果.结果:Smad2 siRNA-3可有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2基因的表达.随siRNA-3终浓度由50 nmol/L增加到100 nmol/L 及200 nmol/L,抑制效率逐渐增强(P<0.05);siRNA-3以终浓度200 nmol/L转染后24 h抑制效果最强,48 h逐渐减弱,但仍明显抑制(P<0.05).结论:应用RNA干扰技术可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad2 基因的表达,其抑制作用具有明显的时间、浓度依赖性.
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