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为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株传代致弱株HuN4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10808位引入MluI作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5’端上游引入CMV启动子,3’端引入丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号(BGH)。将各片段依次连接克隆于改造的pBeloBAC11载体中,构建含有全长HP-PRRSV致弱株cDNA感染性克隆pBeloBAC11-HuN4-F30,并将全