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为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）HuN4株传代致弱株HuN4-F30感染性克隆，本研究利用高保真DNA聚合酶，分6个片段进行病毒全基因组序列扩增，并通过点突变在其基因组10808位引入MluI作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5’端上游引入CMV启动子，3’端引入丁型肝炎病毒（HDV）核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号（BGH）。将各片段依次连接克隆于改造的pBeloBAC11载体中，构建含有全长HP-PRRSV致弱株cDNA感染性克隆pBeloBAC11-HuN4-F30，并将全