【摘 要】
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为了进一步了解Notch1蛋白,本研究用BLAST方法对不同动物Notch1基因的同源性及遗传进化情况进行了分析,通过PCR扩增获得Notch1基因,并构建了与GST标签融合表达的原核表达载体、与GFP标签融合表达的真核表达载体.将双酶切和测序鉴定的阳性克隆分别转化BL21感受态细胞和转染BHK21细胞进行原核和真核表达,并用Western blot和荧光显微镜鉴定.同时,与GFP标签对照确定其在细胞中的定位情况.结果 显示,扩增的Notch1基因片段约780 bp,为Notch1基因的部分序列,Notc
【机 构】
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塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室/新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室,新疆阿拉尔843300
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为了进一步了解Notch1蛋白,本研究用BLAST方法对不同动物Notch1基因的同源性及遗传进化情况进行了分析,通过PCR扩增获得Notch1基因,并构建了与GST标签融合表达的原核表达载体、与GFP标签融合表达的真核表达载体.将双酶切和测序鉴定的阳性克隆分别转化BL21感受态细胞和转染BHK21细胞进行原核和真核表达,并用Western blot和荧光显微镜鉴定.同时,与GFP标签对照确定其在细胞中的定位情况.结果 显示,扩增的Notch1基因片段约780 bp,为Notch1基因的部分序列,Notch1在不同动物间的基因序列同源性为94％以上,遗传进化关系上分为3个分支.Western blot检测结果显示,构建的原核表达pGEX-KG-Notch1能够表达预期大小为56 kDa的融合蛋白;荧光显微镜检测显示Notch1与GFP的融合蛋白分布在整个细胞中,但主要集中于细胞核,而GFP空白对照仅分布于细胞质中,说明Notch1主要定位于细胞核中.本研究为进一步探索Notch1与KLP1的相互作用及其功能奠定了基础.
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