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将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒（AIVH5N1、H6N2、H9N2）分别接种鸡胚，收集尿囊液，分离提取AIV总RNA。参考H1～H15，亚型禽流感病毒的核蛋白（NP）基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素（HA）基因序列，设计四对引物：NP1，NP2；H5P1，H5P2；H6P1，H6P2；H9P1，H9P2，混合为PCR扩增多重引物MP1，下游引物NP2、H5P2、H6P2、H9P2混合为逆转录反应多重引物MP2。AIV总RNA在相同反应条件下经MP2逆