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目的 探讨基因枪转导突变特异性K-ras siRNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用.方法根据胰腺癌细胞系突变特征,设计突变特异性K-ras siRNA;应用基因枪将siRNA转导入胰腺癌细胞系,提取总RNA和胞浆蛋白;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)方法,检测基因枪转导突变特异性K-ras siRNA对突变型K-ras基因表达的干扰作用;行细胞爬片K-ras p21蛋白免疫组织化学染色,探讨siRNA对K-ras p21蛋白表达的抑制作用;采用CCK-8(cell counting kit-8)活细胞计数法,绘制转基因前后细胞生长曲线,观察siRNA的抑瘤效果.结果RT-PCR结果显示,K-ras突变特异性siRNA,能有效抑制K-ras基因表达(P＜0.05);Westernblot和免疫组织化学结果表明,K-ras p21蛋白的表达明显降低(P＜0,05);细胞生长曲线显示,转导siRNA组较对照组细胞生长明显受抑制(P＜0.05).结论基因枪可以有效地对小片段双链siRNA进行细胞内转导;突变特异性K-ras siRNA,可显著下调胰腺癌细胞系突变型K-ras mRNA及K-ras p21蛋白表达,并能有效抑制肿瘤细胞的增殖。