【摘 要】
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目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性.方法:采用诱生腹水法制备抗体,Protein A免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测
【机 构】
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苏州大学基础医学与生物科学学院免疫学系,苏州,215123;江苏荃信生物医药有限公司,泰州,225300;苏州大学实验动物中心,苏州,215123
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目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性.方法:采用诱生腹水法制备抗体,Protein A免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测定其纯度;ELISA及流式细胞术检测抗体与重组CD28抗原及Jurkat膜表达CD28的结合活性,表面等离子体共振技术检测抗体与CD28的结合动力学参数,并研究抗体对外周血T细胞增殖的影响.结果:制备获得纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,其纯度>95％,能够结合重组及天然表达的CD28,其半数效应浓度(EC50)分别为19.8μg/ml和15.2μg/ml,该抗体与CD28结合亲和力常数(KD)为2.13×10-9M.基于细胞的活性分析结果表明,该抗体具有明显的促进人外周血T细胞增殖的活性.结论:本研究制备获得纯化的鼠抗人CD28单克隆抗体,该抗体具有良好的识别CD28的特性以及促进外周血T细胞增殖的活性.
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