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摘要：水质监测质量保证是一种保证监测数据准确可靠的方法，是整个监测过程的全面质量管理。为保证实验室内分析质量所采取的一系列控制措施，文章针对水质监测微生物实验室的质量控制进行探讨。
关键词：水质环境监测；实验室；质量控制
中图分类号：X832文献标识码：A 文章编号：1000－8136（2011）24－0027－02
水质环境监测质量控制是环境监测质量保证的一个部分，它包括实验室内部质量控制和实验室外部质量控制。实验室内部质量控制，是实验室自我控制的常规程序，它反映分析质量稳定性状况，发现分析中的异常情况，随时采取相应的校正措施，也就是避免和减少在任何一个实验操作过程中，由于人为的、设备上、材料供应上、采样步骤和分析方法上所产生的错误，实行有次序的实际工作。
1水质监测微生物样品的采集
1.1水质监测微生物实验室先备齐采集微生物样品的无菌采样玻璃瓶
许多水体随时间和空间会发生很大变化，必须制定出合理的采样规划。为保证采集的水样必须有代表性，采样时固定取水点，统一时间；采水量应为瓶容量的80%，以便在检验时充分混匀；采样时应直接采集，不得用水样刷洗已灭菌的采样瓶，并避免手指和其他物品对瓶口的玷污；采样时不可搅动水底的沉积物；采集管网水的样品前应对水龙头进行消毒，方法为用火焰在龙头表面烧灼片刻（3～5 s），而后放水5～10 min；我区农村生活饮用水部分水样为蓄水池，需要备一干净的水桶，放入水池中数分钟，尽量不取表面水，提水后将水灌入无菌瓶中，手注意不要接触到无菌瓶口和瓶塞。
1.2水样的保存达到减缓微生物繁殖的作用
本实验室采用低温冷藏箱来保存水样，水样全部采集后立即送回实验室；在运输中，玻璃容器要防止破裂，须有固定措施，防止样品容器倾倒和样品溢出。
2室内质量控制
2.1运行全面的质量管理
本中心2004年通过计量认证，2008年计量认证通过复审。在微生物学检验工作中，影响检测工作质量的设施环境包括无菌间（洁净室）、生物安全柜、培养箱、冰箱、压力蒸汽灭菌装置等。在日常工作中，必须保证这些设施、设备始终处于良好状态，定期对仪器进行正确维护、校准质控。本实验室有一台老式恒温培养箱，由于胶条老化，每次需细致检查所显示温度以及可否关闭严密，以免影响检测工作质量。灭菌室要保持清洁，需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过高温灭菌。使用的刻度吸管一定要在管口塞好棉塞，避免洗耳球不洁对实验结果产生影响。加强无菌观念，操作要严格。
2.2每批培养基在使用前，须经无菌检验
配置每批培养基均要做好记录，登记培养基的名称、批次、成分和含量、配制日期、灭菌条件、pH值、有效期、无菌检验以及配置人。培养基应该以少量勤配为宜。
2.3量值溯源的质量控制
一般情况下，微生物检验结果不作复检，故异常或超标结果调查时，需检查所用的实验器具、材料、溶液、样品是否正确和符合要求；与检验人员讨论检验方法，确认无操作和理解方面问题；确认检验仪器设备运行正常；确认检验操作有无差错；检验同一时段其他样品的检验结果和微生物鉴定结果；阴性和阳性对照是否得当；检验时环境质量状况及其污染菌鉴别资料。
3水质微生物样品检测中的质量控制
微生物水样采集后送至水质检测室，同时将样品的相关信息及记录移交给接样员，接样员给予水样惟一的样品编号。样品进入到生物检测室后，检测人员应严格参照水质标准GB/T5750.12－2006所规定的方法对微生物样品无菌操作进行检测，同时进行培养基空白对照。检验中所用的一切用品必须是完全灭菌的，在灭菌前应彻底洗涤干净，121 e高压蒸汽灭菌20 min，或160 e干烤2 h。培养基和稀释液按规定要求进行高压蒸汽灭菌。
3.1检测菌落总数的质量控制
在接种前应将水样充分摇匀，使水中的细菌均匀分布于水中；水样稀释时应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖外侧部分粘附的检液混入其中。将水样注入皿内时，从皿侧加入，不要揭去皿盖，最后将吸管直立使水流空，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出，而不要吹出。为防止产生片状菌落，水样加入平皿后，在20 min内向皿内倾入营养琼脂培养基，并立即混合均匀。皿内琼脂凝固后，不要放置长久后才翻转培养，而应于琼脂凝固后，在数分钟内将平皿翻转进行培养，这样可避免菌落蔓延生长。
3.2检测大肠菌群的质量控制
接种后摇动试管，使水样与乳糖发酵管混匀；乳糖发酵试验中常有产气量少或产酸不产气的情况，有时倒管内虽无气体，但在液面及管壁却可以看到缓缓上浮的小气泡，这时不要放弃，继续做下一步证实实验。初发酵阳性则需进一步革兰染色和继续接种培养观察。挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系，一定要挑取典型菌落，如无应多挑几个以防假阴性。
4水质微生物样品检测后的质量控制
水质微生物检验员在实验后应及时做好数据记录，样品培养后的菌量、形态及检测其他相关信息，如培养温度、培养时间等应填写到相关项目的原始记录表中。将记录表送交内审员审核，审核后的数据合理无误后交给报告员打印检测报告，报告核准签发后，则可向社会出具具有法律效力的检测报告。
微生物检验特点为：不能脱离手工，以定性实验为主，主观判断机会较多。因此，以上检测就要求参与水质微生物样品检测的人员的资历、专业经验、检验能力、操作熟练程度尤为重要，故要求有资质的实验人员进行操作。
5微生物检验的体会
特性不稳定，数量始终在变化中；检验周期长，形成肉眼可见菌落，一般在48 h以上；同一样品无法重复检测，样品容器一旦打开，应视为污染品特征。故微生物检验异常结果的调查与评价显得更为复杂和困难。为了提高微生物检验结果的可靠性，除了检验人员的专业技术、工作经验和仪器设备要求较高以外，还必须加强微生物实验室的质量控制。
2008年，本中心压力蒸汽灭菌器自我监测2次不合格后，查找原因为一位新的操作员操作方法不正确，缺乏排除故障的经验，导致灭菌失败。这就提示我们要定期组织培训，尤其对新进员工的培训，使其掌握压力蒸汽灭菌器的工作原理和性能及易导致灭菌失败的环节，及时详细记录压力蒸汽灭菌器的压力、温度、时间，确保有效运行。
选择培养基厂家的品牌质量保障和相对固定。培养大肠埃希菌的培养基为EC2MUG，2009年枯水期监测，我们新进了另一个厂家的试剂，用标准菌株进行验证，阴、阳对照产生荧光不明显，故放弃用此厂家试剂，造成了试剂的浪费。
实验过程中需严格培养温度。大肠埃希菌的生长温度范围为15～46 e，一次实验操作，无意中把已接种样本的发酵管的试管架放置于培养箱的底座处，考虑底座处温度较温差箱箱体中央温度高，为46.5 e，不适宜大肠埃希菌的生长，故导致培养基无生长，幸好及时发现才避免此次实验的失误。
室内质控的样品复测方式，选择微生物检测结果较稳定、短期内变化不大的管网水，让本实验室工作人员进行检测，根据检测的结果与以往检测结果作比对，根据两次检验结果的符合程度的相对偏差范围，及时发现人员工作技能和检测仪器值得肯定和应该改进的部分，从而发现实验室可能存在的缺陷。每年参加上级疾控中心组织的实验室间考核和能力验证活动。
6结束语
综上所述，水质微生物实验室质量控制，是整个检验质量控制中关键的环节，每一个水质检测人员及实验室人员必须慎重、认真对待。只有这样，才能确保准确无误的检验结果。
参考文献
1 王江.水质监测实验室的质量控制和质量保证［J］.山西科技，2010（03）
Environmental Monitoring Microbial Water Quality Control Method
Cheng Min
Abstract: Quality assurance is a water quality monitoring data to ensure accurate and reliable method of monitoring is the monitoring process of total quality management. To ensure the quality of laboratory analysis of a series of control measures taken by the article for microbiological water quality monitoring laboratory quality control were discussed.
Key words: water quality environmental monitoring; laboratory; quality control
关键词：水质环境监测；实验室；质量控制
中图分类号：X832文献标识码：A 文章编号：1000－8136（2011）24－0027－02
水质环境监测质量控制是环境监测质量保证的一个部分，它包括实验室内部质量控制和实验室外部质量控制。实验室内部质量控制，是实验室自我控制的常规程序，它反映分析质量稳定性状况，发现分析中的异常情况，随时采取相应的校正措施，也就是避免和减少在任何一个实验操作过程中，由于人为的、设备上、材料供应上、采样步骤和分析方法上所产生的错误，实行有次序的实际工作。
1水质监测微生物样品的采集
1.1水质监测微生物实验室先备齐采集微生物样品的无菌采样玻璃瓶
许多水体随时间和空间会发生很大变化，必须制定出合理的采样规划。为保证采集的水样必须有代表性，采样时固定取水点，统一时间；采水量应为瓶容量的80%，以便在检验时充分混匀；采样时应直接采集，不得用水样刷洗已灭菌的采样瓶，并避免手指和其他物品对瓶口的玷污；采样时不可搅动水底的沉积物；采集管网水的样品前应对水龙头进行消毒，方法为用火焰在龙头表面烧灼片刻（3～5 s），而后放水5～10 min；我区农村生活饮用水部分水样为蓄水池，需要备一干净的水桶，放入水池中数分钟，尽量不取表面水，提水后将水灌入无菌瓶中，手注意不要接触到无菌瓶口和瓶塞。
1.2水样的保存达到减缓微生物繁殖的作用
本实验室采用低温冷藏箱来保存水样，水样全部采集后立即送回实验室；在运输中，玻璃容器要防止破裂，须有固定措施，防止样品容器倾倒和样品溢出。
2室内质量控制
2.1运行全面的质量管理
本中心2004年通过计量认证，2008年计量认证通过复审。在微生物学检验工作中，影响检测工作质量的设施环境包括无菌间（洁净室）、生物安全柜、培养箱、冰箱、压力蒸汽灭菌装置等。在日常工作中，必须保证这些设施、设备始终处于良好状态，定期对仪器进行正确维护、校准质控。本实验室有一台老式恒温培养箱，由于胶条老化，每次需细致检查所显示温度以及可否关闭严密，以免影响检测工作质量。灭菌室要保持清洁，需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过高温灭菌。使用的刻度吸管一定要在管口塞好棉塞，避免洗耳球不洁对实验结果产生影响。加强无菌观念，操作要严格。
2.2每批培养基在使用前，须经无菌检验
配置每批培养基均要做好记录，登记培养基的名称、批次、成分和含量、配制日期、灭菌条件、pH值、有效期、无菌检验以及配置人。培养基应该以少量勤配为宜。
2.3量值溯源的质量控制
一般情况下，微生物检验结果不作复检，故异常或超标结果调查时，需检查所用的实验器具、材料、溶液、样品是否正确和符合要求；与检验人员讨论检验方法，确认无操作和理解方面问题；确认检验仪器设备运行正常；确认检验操作有无差错；检验同一时段其他样品的检验结果和微生物鉴定结果；阴性和阳性对照是否得当；检验时环境质量状况及其污染菌鉴别资料。
3水质微生物样品检测中的质量控制
微生物水样采集后送至水质检测室，同时将样品的相关信息及记录移交给接样员，接样员给予水样惟一的样品编号。样品进入到生物检测室后，检测人员应严格参照水质标准GB/T5750.12－2006所规定的方法对微生物样品无菌操作进行检测，同时进行培养基空白对照。检验中所用的一切用品必须是完全灭菌的，在灭菌前应彻底洗涤干净，121 e高压蒸汽灭菌20 min，或160 e干烤2 h。培养基和稀释液按规定要求进行高压蒸汽灭菌。
3.1检测菌落总数的质量控制
在接种前应将水样充分摇匀，使水中的细菌均匀分布于水中；水样稀释时应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖外侧部分粘附的检液混入其中。将水样注入皿内时，从皿侧加入，不要揭去皿盖，最后将吸管直立使水流空，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出，而不要吹出。为防止产生片状菌落，水样加入平皿后，在20 min内向皿内倾入营养琼脂培养基，并立即混合均匀。皿内琼脂凝固后，不要放置长久后才翻转培养，而应于琼脂凝固后，在数分钟内将平皿翻转进行培养，这样可避免菌落蔓延生长。
3.2检测大肠菌群的质量控制
接种后摇动试管，使水样与乳糖发酵管混匀；乳糖发酵试验中常有产气量少或产酸不产气的情况，有时倒管内虽无气体，但在液面及管壁却可以看到缓缓上浮的小气泡，这时不要放弃，继续做下一步证实实验。初发酵阳性则需进一步革兰染色和继续接种培养观察。挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系，一定要挑取典型菌落，如无应多挑几个以防假阴性。
4水质微生物样品检测后的质量控制
水质微生物检验员在实验后应及时做好数据记录，样品培养后的菌量、形态及检测其他相关信息，如培养温度、培养时间等应填写到相关项目的原始记录表中。将记录表送交内审员审核，审核后的数据合理无误后交给报告员打印检测报告，报告核准签发后，则可向社会出具具有法律效力的检测报告。
微生物检验特点为：不能脱离手工，以定性实验为主，主观判断机会较多。因此，以上检测就要求参与水质微生物样品检测的人员的资历、专业经验、检验能力、操作熟练程度尤为重要，故要求有资质的实验人员进行操作。
5微生物检验的体会
特性不稳定，数量始终在变化中；检验周期长，形成肉眼可见菌落，一般在48 h以上；同一样品无法重复检测，样品容器一旦打开，应视为污染品特征。故微生物检验异常结果的调查与评价显得更为复杂和困难。为了提高微生物检验结果的可靠性，除了检验人员的专业技术、工作经验和仪器设备要求较高以外，还必须加强微生物实验室的质量控制。
2008年，本中心压力蒸汽灭菌器自我监测2次不合格后，查找原因为一位新的操作员操作方法不正确，缺乏排除故障的经验，导致灭菌失败。这就提示我们要定期组织培训，尤其对新进员工的培训，使其掌握压力蒸汽灭菌器的工作原理和性能及易导致灭菌失败的环节，及时详细记录压力蒸汽灭菌器的压力、温度、时间，确保有效运行。
选择培养基厂家的品牌质量保障和相对固定。培养大肠埃希菌的培养基为EC2MUG，2009年枯水期监测，我们新进了另一个厂家的试剂，用标准菌株进行验证，阴、阳对照产生荧光不明显，故放弃用此厂家试剂，造成了试剂的浪费。
实验过程中需严格培养温度。大肠埃希菌的生长温度范围为15～46 e，一次实验操作，无意中把已接种样本的发酵管的试管架放置于培养箱的底座处，考虑底座处温度较温差箱箱体中央温度高，为46.5 e，不适宜大肠埃希菌的生长，故导致培养基无生长，幸好及时发现才避免此次实验的失误。
室内质控的样品复测方式，选择微生物检测结果较稳定、短期内变化不大的管网水，让本实验室工作人员进行检测，根据检测的结果与以往检测结果作比对，根据两次检验结果的符合程度的相对偏差范围，及时发现人员工作技能和检测仪器值得肯定和应该改进的部分，从而发现实验室可能存在的缺陷。每年参加上级疾控中心组织的实验室间考核和能力验证活动。
6结束语
综上所述，水质微生物实验室质量控制，是整个检验质量控制中关键的环节，每一个水质检测人员及实验室人员必须慎重、认真对待。只有这样，才能确保准确无误的检验结果。
参考文献
1 王江.水质监测实验室的质量控制和质量保证［J］.山西科技，2010（03）
Environmental Monitoring Microbial Water Quality Control Method
Cheng Min
Abstract: Quality assurance is a water quality monitoring data to ensure accurate and reliable method of monitoring is the monitoring process of total quality management. To ensure the quality of laboratory analysis of a series of control measures taken by the article for microbiological water quality monitoring laboratory quality control were discussed.
Key words: water quality environmental monitoring; laboratory; quality control