【摘 要】
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目的 探讨胰岛在获取、分离及纯化等过程中出现细胞凋亡的相关因素及应对策略.方法 经供者腹主动脉灌注4℃的UW液后,切取供者胰腺,并进行胶原酶灌注、消化及梯度离心,分离、
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目的 探讨胰岛在获取、分离及纯化等过程中出现细胞凋亡的相关因素及应对策略.方法 经供者腹主动脉灌注4℃的UW液后,切取供者胰腺,并进行胶原酶灌注、消化及梯度离心,分离、提取胰岛.分别于胶原酶灌注前、灌注后、消化后及胰岛分离后等时点,采用原位末端标记法(TUNEL法)检测胰岛细胞凋亡情况,采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)水平,采用HE染色和双硫腙染色观察胰岛的形态学改变.结果 在分离、纯化胰岛的各个过程中,均出现了胰岛细胞凋亡的现象,其中在胶原酶灌注后和消化后最为明显,并伴随MDA的高表达,表达水平分别为(6.18±2.38)nmol/mgprot和(9.21±2.75)nmol/mgprot,均明显高于灌注前的(4.21±1.83)nmol/mgprot(P＜0.05和P＜0.01);而此时SOD水平则显著下降,至胰岛分离后仍处于较低水平,与灌注前相比,差异均有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01).胶原酶灌注前,胰岛结构完整;胶原酶灌注后,胰岛周围组织结构膨胀;消化后,胰岛膜性结构被破坏,但能勉强维持岛状结构;胰岛分离后结构基本完整.结论 在提取胰岛的过程中,胶原酶灌注及消化可引起胰岛细胞凋亡,其机制可能与氧化损伤有关,抗氧化措施可作为移植前保护胰岛的手段.
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