【摘 要】
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目的 探讨Opa相互作用蛋白5-反义RNAl(OIP5-AS1)调控miR-375/活化蛋白C(APC)轴对急性胰腺炎(AP)的作用及其机制.方法 从NCBI数据库中获取AP相关的GEO表达数据,分析差异表达的miRNAs.利用生物信息学数据库预测miR-375的上/下游靶点,将OIP5-AS1和APC纳入研究.利用双荧光素酶报告基因检测系统进一步验证靶向关系.采用雨蛙素(caerulein)诱导的AR42J细胞作为AP细胞模型.qRT-PCR检测OIP5-AS1、miR-375和APC的表达;LDH细胞
【机 构】
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十堰市太和医院急诊科,湖北省十堰442000
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目的 探讨Opa相互作用蛋白5-反义RNAl(OIP5-AS1)调控miR-375/活化蛋白C(APC)轴对急性胰腺炎(AP)的作用及其机制.方法 从NCBI数据库中获取AP相关的GEO表达数据,分析差异表达的miRNAs.利用生物信息学数据库预测miR-375的上/下游靶点,将OIP5-AS1和APC纳入研究.利用双荧光素酶报告基因检测系统进一步验证靶向关系.采用雨蛙素(caerulein)诱导的AR42J细胞作为AP细胞模型.qRT-PCR检测OIP5-AS1、miR-375和APC的表达;LDH细胞毒性分析试剂盒检测LDH的释放;ELlSA法检测白细胞介素-18 (m-18)和IL-1β的表达;流式细胞术检测caspase-1的活性;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NLR家族pyrin域蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)和caspase-1的表达.结果 在雨蛙素刺激的AR42J细胞中,OIP5-AS1和APC表达降低,miR-375表达升高(均P ＜0.05).过表达OIP5-AS1可减轻雨蛙素诱导的细胞损伤,减少炎症因子(IL-18、IL-1β)和LDH的释放,抑制caspase-1的活化并减少GSDMD和NLRP3的蛋白表达(均P＜0.05).OIP5-AS1通过抑制miR-375调控APC的表达,过表达miR-375或沉默APC均可部分逆转过表达OIP5-AS1减轻的AP细胞模型损伤(均P＜0.05).结论 OIP5-AS1通过吸附miR-375,上调APC抑制腺泡细胞焦亡,抑制AP进展.
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