副猪嗜血杆菌aroA基因鉴定及遗传进化分析

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【目的】细菌aroA基因参与芳香族氨基酸的生物合成,被成功应用于细菌分类和基因失活致弱突变菌株的构建。副猪嗜血杆菌(Hps)是感染猪出现多发性浆膜炎和关节炎的一种病原细菌,鉴定该菌aroA全基因序列将有助于鉴定遗传进化关系和突变分析。【方法】利用PCR和细菌基因组步移技术鉴定Hps的aroA基因序列,进而对不同血清型菌株该基因序列进行鉴定,并与其它革兰氏阴性细菌进行比对和遗传进化分析。【结果】自Hps血清5型基因组DNA中获得包含完整aroA基因的3.7kb基因片段,其中aroA基因全长1314bp,编码产物长度437aa,分子量大小47.9kDa,该基因上游为磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因。自本试验选择的Hps不同血清型菌株中均可扩增出包含完整aroA基因的1476bp片段,且这些不同血清型菌株间核酸序列同源性在97.7%以上。Hps血清5型aroA基因序列与巴氏杆菌科其它成员核酸序列同源性为70.6%~78.9%,与E.coli和S.typhi-murium的同源性分别为66.4%和67.2%。【结论】本试验首次对Hps的15个血清型国际参考菌株及地方分离株aroA全基因序列进行了鉴定,序列比较结果显示aroA基因在革兰氏阴性细菌中具有较高的同源性。aroA基因鉴定对构建基因失活突变菌株以研究Hps生物学特性奠定了基础。
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