【摘 要】
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目的研究饥饿条件下不同浓度硝酸盐对脑胶质瘤C6和U87细胞生物活性的影响以及自噬相关蛋白的变化。方法将C6和U87细胞分为对照组和饥饿组，对照组给予常规培养基培养，饥饿组给予等体积的Hank′s平衡盐溶液培养。两组细胞分别应用0 mmol/L、0.05 mmol/L、0.20 mmol/L和0.50 mmol/L的硝酸盐处理12 h和24 h，然后采用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖情况；流式细胞术
【机 构】
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首都医科大学附属北京天坛医院 100070,首都医科大学，北京市神经外科研究所 100070,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科 100070,首都医科大学附属北京天坛医院 100070,
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目的研究饥饿条件下不同浓度硝酸盐对脑胶质瘤C6和U87细胞生物活性的影响以及自噬相关蛋白的变化。
方法将C6和U87细胞分为对照组和饥饿组，对照组给予常规培养基培养，饥饿组给予等体积的Hank′s平衡盐溶液培养。两组细胞分别应用0 mmol/L、0.05 mmol/L、0.20 mmol/L和0.50 mmol/L的硝酸盐处理12 h和24 h，然后采用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖情况；流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平；实时荧光定量PCR实验检测各组p62的表达水平；蛋白质免疫印迹实验检测自噬相关蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ及硝酸盐转运蛋白(SLC17A5)的表达水平。
结果与对照组相比，饥饿状态引起C6和U87细胞的增殖能力下降，C6细胞培养12 h和24 h后分别下降了(63.60±2.40)%和(77.10±2.70)%；U87细胞分别下降了(65.60±2.70)%和(86.80±3.20)%(均P<0.01)；给予0.20 mmol/L和0.50 mmol/L的硝酸盐处理后，饥饿组C6和U87细胞的增殖能力与0 mmol/L组比较均明显下降(均P<0.05)，而0.05 mmol/L的硝酸盐浓度对各组细胞的增殖能力均无明显影响(均P>0.05)。流式细胞术检测显示，C6细胞对照组给予0.20 mmol/L和0.50 mmol/L硝酸盐后，各组膜联蛋白Ⅴ和碘化丙啶的阳性细胞数比较差异均无统计学意义(均P>0.05)；饥饿12 h后，0 mmol/L组膜联蛋白Ⅴ和碘化丙啶的阳性细胞所占比率分别为(13.50±0.71)%和(7.80±0.34)%；0.20 mmol/L组分别为(17.30±0.82)%和(10.30±0.42)%；0.50 mmol/L组分别为(19.40±0.75)%和(12.60±0.75)%，组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。U87各组细胞的凋亡水平也呈现相同的变化趋势。实时荧光定量PCR实验显示，对照组给予不同浓度的硝酸盐不影响C6和U87细胞p62 mRNA的表达水平(均P>0.05)；而饥饿组给予不同浓度的硝酸盐后C6和U87细胞p62 mRNA的表达水平均明显上调(均P<0.05)。蛋白质免疫印迹实验显示，饥饿组给予不同浓度的硝酸盐后LC3Ⅱ/Ⅰ的比值明显下调，而p62和SLC17A5的表达水平明显上调(均P<0.05)。
结论硝酸盐可抑制饥饿状态下胶质瘤细胞的增殖能力和细胞内的自噬水平，从而诱导细胞发生凋亡。
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