miR-33a靶向Lipin1和IRS2调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zl8232565
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旨在揭示miR-33a在绵羊前体脂肪细胞分化中的生物学功能.本研究以15日龄雄性绵羊背部皮下前体脂肪细胞为试验材料,所有的试验均设立3个重复;利用生物信息学软件预测miR 33a的靶基因,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;用qPCR和West blotting分别检测miR-33a、Lipin1和IRS2及其编码蛋白的表达,以揭示miR-33a与其靶基因在绵羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;慢病毒介导实现miR-33a的过表达和干扰后,检测Lipin1、IRS2和成脂标志基因的表达,并用油红O染色检测脂滴沉积能力,以解析miR-33a对其靶基因的调节机制.生物信息学分析发现,miR-33a与Lipin1和IRS2 3-UTR都存在结合位点,miR-33a显著下调Lipin1和IRS2野生型双荧光质粒的相对荧光活性(P<0.05);在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达趋势相反;过表达miR-33a后,显著下调了Lipin1 (P<0.01)和IRS2(P<0.05)及其编码蛋白以及成脂标志基因的表达;干扰miR-33a后,这些基因和蛋白的表达则显著上调;过表达miR-33a减少了脂滴沉积,干扰miR-33a促进了脂滴沉积.在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达呈负相关.miR-33a靶向Lipin1和IRS2的3UTR抑制绵羊前体脂肪细胞分化和脂滴沉积.
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