【摘 要】
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目的:探讨沉默细胞黏附分子CHL1(close homolog of L1)基因表达对食管癌KYSE-R细胞放射敏感性的影响.方法:选取食管癌KYSE细胞,采用连续照射的方法构建放射抗拒性的KYSE-R细
【机 构】
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湖北医药学院附属十堰市太和医院肿瘤防治中心,湖北十堰442000;锦州医科大学研究生学院,辽宁锦州121001;武汉大学中南医院放化疗科,湖北武汉430071
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目的:探讨沉默细胞黏附分子CHL1(close homolog of L1)基因表达对食管癌KYSE-R细胞放射敏感性的影响.方法:选取食管癌KYSE细胞,采用连续照射的方法构建放射抗拒性的KYSE-R细胞;分别采用克隆形成实验和FCM法检测放射抗拒KYSE-R与亲本细胞KYSE细胞间的放射敏感性差异;蛋白质印迹法检测KYSE和KYSE-R细胞中CHL1蛋白的表达水平.采用脂质体法将3条针对CHL1基因不同靶点的 siRNA-CHL1(siCHL1-1、siCHL1-2和 siCHL1-3)分别转入食管癌放射抗拒细胞KYSE-R,利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法确定干扰效果最佳的siRNA.将siCHL1-3转染至KYSE-R细胞中,经X-照射后再分别用克隆形成实验、FCM法和CCK-8法检测沉默CHL1基因表达后对KYSE-R细胞放射敏感性的影响,并进一步采用蛋白质印迹法检测KYSE-R细胞中凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达情况.结果:构建获得具有更强的放射抗拒性的KYSE-R细胞.KYSE-R细胞中CHL1蛋白的表达水平明显高于亲本KYSE细胞(P<0.05),siCHL1-3的干扰效果最佳CPC0.05).沉默CHL1基因表达后,经X-射线照射后CHL1干扰组KYSE-R细胞的存活曲线明显降低(P = 0.0001),细胞凋亡的凋亡率明显提高,被阻滞在G2/M期细胞所占的百分比明显增加(PC0.05),细胞的增殖能力被明显抑制(P值均<0.05).蛋白质印迹法结果显示,经X-射线照射后,CHL1干扰组KYSE-R细胞中Bax蛋白表达水平明显增高,而Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达水平明显降低CP值均 < 0.05).结论:干扰CHL1基因表达可增强食管癌放射抗拒KYSE-R细胞对放射的敏感性.
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