目的 探讨表皮生长因子(EGF)对兔角膜上皮细胞的增殖刺激作用及其与细胞周期相关蛋白表达的关系.方法 实验研究.原代培养的兔角膜上皮细胞,以不同浓度(0、15、10、25、50 ug/L)EGF作用72 h、以10ug/L EGF作用不同时间(0、2、4、6、8、10 d)后,通过相差显微镜观察细胞形态,并通过水溶性四氮唑(WST-1)细胞增殖实验检测细胞增殖情况;采用Western blot检测10ug/L EGF作用0、24、48、72 h后细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CDKIs)p21、p27及p18的表达状况.采用SPSS 11.5统计软件对各实验组结果 数据进行统计分析,两样本比较采用t检验,多个样本比较采用单因素方差分析.结果 比较不同浓度的EGF对兔角膜上皮细胞的增殖影响效果,加入5、10、25及50ug/L EGF组72 h的细胞增殖率分别为9.0%、23.5%、20.8%及17.7%,与未加入EGF(0 ug/L)的对照组增殖率相比较,差异有统计学意义(F=45.48,P<0.01),其中10 ug/L EGF对兔角膜上皮细胞的增殖促进作用最强,且相同浓度EGF组兔角膜上皮细胞的增殖率具有明显的时间依赖性.10 ug/L EGF作用0、24、48及72 h,各细胞周期相关蛋白表达量与B肌动蛋白表达量的比值:细胞周期蛋白D1为0.253、0.591、0.885、1.043,CDK4为0.422、0.588、0.804、1.241,表达水平随时间推移逐渐升高,而p27为0.225、0.163、0.107、0.082,表达水平随时间推移逐渐下降,p21为0.432、0.391、0.407、0.329,p18为0.268、0.274、0.231、0.309,表达不随时间推移而变化.结论 EGF对兔角膜上皮细胞具有明显的促增殖作用,可能与其上调细胞周期蛋白D1和CDK4以及抑制p27的表达密切相关.(中华眼科杂志,2009,45:153-157)
表皮生长因子对兔角膜上皮细胞增殖及细胞周期相关蛋白作用的研究
【摘 要】
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目的 探讨表皮生长因子(EGF)对兔角膜上皮细胞的增殖刺激作用及其与细胞周期相关蛋白表达的关系.方法 实验研究.原代培养的兔角膜上皮细胞,以不同浓度(0、15、10、25、50 ug/L)EGF作用72 h、以10ug/L EGF作用不同时间(0、2、4、6、8、10 d)后,通过相差显微镜观察细胞形态,并通过水溶性四氮唑(WST-1)细胞增殖实验检测细胞增殖情况;采用Western blot检测
【机 构】
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110005,沈阳,中国医科大学附属第四医院眼科,辽宁省高校晶状体重点实验室,110005,沈阳,中国医科大学附属第四医院眼科,辽宁省高校晶状体重点实验室
【发表日期】
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2009年45期
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