皮质酮预处理对脂多糖激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的调节作用及鸡豆黄素A的保护作用

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目的:研究皮质酮(corticosterone,CORT)预处理对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活小胶质细胞的NLRP3炎症小体是否有调节作用,鸡豆黄素A(BiochaninA)是否抑制其作用.方法:将常规培养的BV2细胞分为5组:Control组、CORT(50 ng·mL-1)组、LPS(10μg·mL-1)组、LPS(10μg·mL-1)+CORT(50 ng·mL-1)组、LPS(10μg·mL-1)+CORT(50 ng·mL-1)+BiochaninA(5μmol·L-1)组.除对照组外,各组先加入CORT(50 ng·mL-1)孵育2 h,然后各组加入相应浓度的LPS(10μg·mL-1)和BiochaninA(5μmol·L-1)共同孵育36 h.采用MTT法检测细胞活力;采用DCFH-DA探针法检测ROS;采用Western-blot法检测各组细胞中5-HTT、ASC、Caspase-1、NLRP3、IL-6、GR、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平.结果:与CORT(50 ng·mL-1)组和LPS(10μg·mL-1)组比较,CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)组细胞活力增加,ROS的表达量也更高;与CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)组比较,CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)+BiochaninA(5μmol·L-1)组细胞的活力降低,ROS的表达量也较低.Western-blot检测显示与CORT(50 ng·mL-1)组和LPS(10μg·mL-1)组比较,CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)组细胞的5-HTT、ASC、Caspase-1、NLRP3、IL-6、GR、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平均增加;与CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)组比较,CORT(50 ng·mL-1)+LPS(10μg·mL-1)+BiochaninA(5μmol·L-1)组上述蛋白表达量低.结论:CORT预处理对LPS激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的表达有上调作用,而BioA可以降低NLRP3炎症小体相关蛋白的表达.
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